革蘭染色法一般包括初染、媒染
、脫色
、複染等四個步驟，具體操作方法是：塗片固定；草酸銨結晶紫染1 min，自來水衝洗；加碘液覆蓋塗麵染1 min；水洗，用吸水紙吸去水分；加95%酒精數滴
，並輕輕搖動進行脫色，30 S後水洗，吸去水分
；複紅染色液(稀)染30 Shou，zilaishuichongxi。ganzao，jingjian。ransedejieguo
，gelanzhengfanyingjuntidouchengzise，fufanyingjuntidouchenghongse。danzaiwomendeshijiransejieguozhong
，tebieshitongxuezaichuxueshiwangwanghuichuxianyixiecuowushiransejieguoyushijijieguobuyizhi。tongguoduoniandejiaoxueshijian，womenzongjiechukenengshiyixiajifangmiandeyinsudeyingxiang。

1 操作因素

1.1 塗片太厚 zaitupianshixijuntiaodetaiduo，meifafenkai

，zaituoseshijiubunengjiangdiyiburanshangdejiejingzideyansetuoqu

，kenenghuishigelanyinxingjunyechuxianzise，wurenweigelanyangxingjun。

1.2 脫色時間 陽性菌透性小，不易被脫色，陰性菌透性大
，易脫色
；danzheshizaigudingdeshijiantiaojianxiadejieguo，ruguoyanchangtuoseshijian，yehuishituosejishentoujinyangxingjundexibaobizhong，shiranshangdejiejingzituoquyanse，zuihouranshangfuhongdeyanse，bianchenggelanyinxingjun。ertuoseshijiantaiduandehuayouhuishiyinxingjunranshangdejiejingzibunengwanquantuose，chuxianzise，wurenweigelanyangxingjun。

1.3 固定方法 固gu定ding不bu僅jin能neng殺sha死si細xi菌jun，改gai變bian細xi菌jun對dui染ran料liao的de通tong透tou性xing，還hai能neng使shi細xi菌jun吸xi附fu在zai玻bo片pian上shang

，保bao持chi原yuan有you的de形xing態tai結jie構gou。固gu定ding方fang法fa是shi將jiang幹gan燥zao後hou的de細xi菌jun塗tu片pian以yi中zhong等deng速su度du通tong過guo火huo焰yan三san次ci，以yi玻bo片pian觸chu及ji手shou背bei皮pi膚fu熱re而er不bu燙tang為wei宜yi。但dan在zai實shi際ji操cao作zuo中zhong有you的de同tong學xue將jiang玻bo片pian在zai火huo焰yan上shang烤kao的de太tai久jiu，改gai變bian了le細xi菌jun原yuan有you的de通tong透tou性xing，會hui使shi細xi菌jun的de染ran色se性xing發fa生sheng變bian化hua。影ying響xiang了le染ran色se的de結jie果guo。

2 細菌因素

2.1 細菌培養時間 細菌的典型形態
、染ran色se性xing是shi在zai對dui數shu生sheng長chang期qi
，取qu這zhe時shi的de細xi菌jun做zuo革ge蘭lan染ran色se可ke以yi反fan應ying細xi菌jun的de真zhen實shi的de染ran色se性xing。如ru果guo細xi菌jun培pei養yang時shi間jian太tai長chang，變bian成cheng了le老lao齡ling菌jun，染ran色se性xing就jiu會hui發fa生sheng變bian化hua，可ke能neng會hui使shi革ge蘭lan陽yang性xing菌jun染ran成cheng革ge蘭lan陰yin性xing菌jun。

2.2 培養基的成分 yibanrenweigelanyangxingjuntineihanyouteshudehedanbaizhimeiyanyuduotangdefuhewu
，tayudianhejiejingzidefuhewujiehehenlao，buyituose。danshiruguopeiyangjizhongquefahedanbaizhimeiyanjiubunenghechengjuntichengfendehedanbaizhimeiyan，xijunyudianhejiejingzidefuhewujiehejiubulaogu，rongyituose，kenenghuishigelanyangxingjunranchenggelanyinxingjun。

3 染液因素

3.1 碘液 dianyezuoweimeiranjinengzengjiaranliaoyubeiranwudeqinheli。ruguodianyefangzhishijiantaichang
，huojingriguangzhaosheshixiao，shiqumeiranjidezuoyong，jiukenengshijiejingziyuxijunjiehedebulaogu

，rongyibeituose，shigelanyangxingjunranchenggelanyinxingjun。

3.2 結晶紫 結晶紫的濃度太高
，就會使染上的顏色不容易被酒精脫色，可能會使革蘭陰性菌染成革蘭陽性菌。

3.3 酒精 酒精作為脫色劑，革蘭染色的脫色酒精濃度為95%
，在此濃度下革蘭陽性菌染上的結晶紫不易被脫去，保留紫色，革蘭陰性菌染上的結晶紫容易被脫去，最後呈紅色。但當酒精的濃度為70% 時，它的脫色能力最強，可能使革蘭陽性菌染上的結晶紫也被脫去，使革蘭陽性菌染成革蘭陰性菌。

綜上所述
，影響染色的其他因素
，還有菌體細胞的構造和其外膜的通透性

，如細胞膜的通透性、膜孔的大小和細胞結構完整與否，在染色上都起一定作用。此外，培養基的組成、菌齡
、染色液中的電介質含量和pH、溫度、藥(yao)物(wu)的(de)作(zuo)用(yong)等(deng)，也(ye)都(dou)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)菌(jun)的(de)染(ran)色(se)，所(suo)以(yi)我(wo)們(men)在(zai)染(ran)色(se)時(shi)要(yao)注(zhu)意(yi)當(dang)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)與(yu)預(yu)想(xiang)的(de)結(jie)果(guo)出(chu)現(xian)不(bu)一(yi)致(zhi)時(shi)
，要(yao)考(kao)慮(lv)到(dao)這(zhe)些(xie)因(yin)素(su)的(de)影(ying)響(xiang)。對(dui)同(tong)學(xue)來(lai)講(jiang)重(zhong)點(dian)強(qiang)調(tiao)操(cao)作(zuo)因(yin)素(su)的(de)影(ying)響(xiang)，使(shi)他(ta)們(men)在(zai)一(yi)開(kai)始(shi)學(xue)習(xi)革(ge)蘭(lan)染(ran)色(se)，就(jiu)認(ren)真(zhen)對(dui)待(dai)，養(yang)成(cheng)良(liang)好(hao)的(de)學(xue)習(xi)態(tai)度(du)，嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)操(cao)作(zuo)規(gui)程(cheng)來(lai)做(zuo)，提(ti)高(gao)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)。