在zai微wei生sheng物wu鑒jian定ding中zhong，革ge蘭lan氏shi染ran色se應ying該gai是shi最zui初chu接jie觸chu的de一yi種zhong區qu分fen細xi菌jun的de實shi驗yan方fang法fa。通tong過guo革ge蘭lan氏shi染ran色se鑒jian定ding後hou
，區qu分fen出chu革ge蘭lan氏shi陽yang性xing菌jun和he陰yin性xing菌jun，憑ping借jie結jie果guo以yi作zuo後hou續xu的de鑒jian定ding分fen離li細xi菌jun。可ke以yi說shuo，革ge蘭lan氏shi染ran色se在zai微wei生sheng物wu研yan究jiu過guo程cheng中zhong，是shi一yi個ge應ying該gai掌zhang握wo的de技ji術shu。
1.細菌的細胞壁

要了解革蘭氏染色的原理
，先了解細菌的細胞壁：

細菌的細胞壁主要由肽聚糖組成，能夠固定細胞外形和保護細胞不受損傷，其主要功能包括：

特定的抗原性以及抵禦抗生素、噬菌體的能力
；

固定細胞外形以及提高機械強度，避免外力的損傷；

是細胞生長、分裂和運動（主要是有鞭毛的細菌）的必需構造；

阻擋大分子物質（對生命活動有危害或潛在危害的物質）進入細胞。

2.細菌細胞壁的差異

細菌細胞壁除了含有肽聚糖
，還有其它組分，這些組分是革蘭氏陽性菌和陰性菌所不同的。

革蘭氏陽性菌的細胞壁主要由60%-95%的肽聚糖組成，還有10%-30%磷壁酸；陰性菌的細胞壁與陽性菌細胞壁相比較，雖然厚度相對薄
，但是成分複雜

，除了肽聚糖外，還有一層由脂多糖、磷脂和若幹外膜蛋白組成的外膜結構。

革蘭氏陽性菌與陰性菌細胞壁的主要差異如下：

肽聚糖層：陽性菌的較厚且層次多
，陰性菌的為單層且薄；

外膜：隻有陰性菌存在外膜結構，包括了脂多糖和類脂；

磷壁酸：多數陽性菌都有磷壁酸，陰性菌不存在磷壁酸
；

對機械力的抗性：陽性菌抗機械力的能力強於陰性菌
；

抗溶菌酶的能力：陰性菌抗溶菌酶的能力優於陽性菌。

3.革蘭氏染色的機製

革ge蘭lan氏shi染ran色se以yi細xi菌jun細xi胞bao壁bi化hua學xue成cheng分fen的de差cha異yi引yin起qi脫tuo色se能neng力li的de不bu同tong為wei基ji礎chu，即ji，細xi菌jun能neng否fou將jiang染ran色se劑ji阻zu礙ai在zai細xi胞bao壁bi中zhong的de原yuan理li，進jin行xing區qu分fen陽yang性xing菌jun和he陰yin性xing菌jun
，其qi結jie果guo為wei：陽性菌的細胞壁能夠將染色劑結晶紫阻留而染成紫色；陰性菌的細胞壁不能將染色劑阻留
，經過複染後形成紅色。

經過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成結晶紫與碘的複合物，該複合物不溶於水。陽性菌因為細胞壁較厚、肽聚糖層多和交聯致密，且不含類脂，當乙醇/丙酮進行脫色處理時，肽聚糖網層結構因失水導致網孔變小，結晶紫與碘的複合物就被阻留在細胞壁中。

陰性菌因為細胞壁較薄，且外膜層類脂物質含量高
，受到乙醇/bingtongzuoyong
，xibaobijiegoufashenggaibian
，waimodeleizhirongjie
，taijutangwangcengbunenggoujiangjiejingziyudiandefuhewuzuliu，zhongxinhuifuweiwusedezhuangtai，ranhoujingguoshahuangdenghongseranjidefuranxingchenghongse。

4.革蘭氏染色的操作

革蘭氏染色的基本步驟如下：

固定：塗片幹後加熱固定
，火焰固定時塗片膜朝上，以中等速度越過火焰3次
，或使用乙醇/甲醇固定；

初染：滴加結晶紫染液，1分鍾，清水洗去染液；

媒染：加碘液
，1分鍾
，水洗；

脫色：加脫色液，搖動10-30秒，至無紫色脫落，水洗；

複染：加複染液
，30秒，水洗；

鏡檢：塗片幹後鏡檢。