細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中，細胞因子在免疫調節
、炎症應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段

，同時在臨床疾病診斷、病程觀察

、療效判斷及細胞因子治療監測方麵具有重要價值。

 

但(dan)是(shi)，由(you)於(yu)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)在(zai)體(ti)內(nei)的(de)含(han)量(liang)甚(shen)微(wei)，給(gei)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)檢(jian)測(ce)帶(dai)來(lai)困(kun)維(wei)，細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)檢(jian)測(ce)尚(shang)未(wei)在(zai)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)上(shang)廣(guang)泛(fan)開(kai)展(zhan)
，已(yi)知(zhi)目(mu)前(qian)采(cai)用(yong)的(de)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)均(jun)不(bu)完(wan)善(shan)
，且(qie)不(bu)同(tong)的(de)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)所(suo)得(de)的(de)結(jie)果(guo)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)，給(gei)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)與(yu)治(zhi)療(liao)帶(dai)來(lai)一(yi)定(ding)的(de)困(kun)難(nan)。因(yin)此(ci)
，有(you)必(bi)要(yao)了(le)解(jie)各(ge)種(zhong)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)的(de)特(te)性(xing)及(ji)影(ying)響(xiang)因(yin)素(su)。

 

目前，細胞因子生物學活性檢測和濃度測定方法主要有以下幾類

 

一.生物學檢測法

 

生物學檢測又稱生物活性檢測，是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。由於各種細胞因子具有不同的活性，例如IL-2促進淋巴細胞增殖，TNF殺傷腫瘤細胞，CSFci 激造血細胞集落形成，IFN保護細胞免受病毒攻擊，因此選擇某一細胞因子獨特的生物活性
，即可對其進行檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類：

 

1．細胞增殖法

 

許多細胞因子具有細胞生 zhang 因子活性，特別是白細胞介素
，如IL-2 ci激t細胞生  zhang  
、IL-3 ci 激肥大細胞生  zhang  
、IL-6 ci 激漿細胞生  zhang  等。利用這一特性，現已篩選出一些對特定細胞因子起反應的細胞，並建立了隻依賴於某種因子的細胞係
，即依賴細胞株(簡稱依賴株)。這些依賴株在通常情況下不能存活，隻有在加入特定因子後才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養基中很快死亡，而加入IL-2後則可右體外 zhang   期培養。在一定濃度範圍內
，細胞增殖與IL-2量呈正比

，因此通過測定細胞增殖情況(如使用3h-tdr摻入法
、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依賴株外
，還有一些短期培養的細胞，如胸腺細胞、骨髓細胞、促有絲分裂原ci 激後的淋巴母細胞等
，均可作為靶細胞來測定某種細胞因子活性。

 

2．靶細胞殺傷法

 

是根據某些細胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細胞而設計的檢測方法。通常靶細胞多選擇體外zhang   期傳代的腫瘤細胞株


，利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細胞的殺傷率。

 

3．細胞因子誘導的產物分析法

 

某些細胞因子可ci激特定細胞產生生物活性物質


，如IL-2、IL-3誘導骨髓細胞合成胺
、IL-6誘導肝細胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測定所誘生的相應產物
，可反映細胞因子的活性。

 

4．細胞病變抑製法

 

病毒可造成靶細胞的損傷
，幹擾素等則可抑製病毒所導致的細胞病變，因此可利用細胞病變抑製法檢測這類因子。

 

二
、免疫學檢測法

 

xibaoyinzijunweidanbaihuoduotai，juyoujiaoqiangdekangyuanxing。suizhezhongzuxibaoyinzidechuxian，kejiaofangbiandihuodexibaoyinzideteyixingkangxueqinghuodankelongkangti
，yincikeliyongkangyuankangtiteyixingfanyingdetexing
，yongmianyixuejishudingliangjiancexibaoyinzi。jinguanxibaoyinzizhongleifanduo

，zhiyaohuodelezhenduimouyiyinzideteyixingkangti(包括多克隆抗體或單克隆抗體)均可采用相似的技術開展工作。常用的方法包括ELISA、RIA及ji免mian疫yi印yin跡ji法fa。目mu前qian，幾ji乎hu所suo有you常chang見jian細xi胞bao因yin子zi的de檢jian測ce試shi劑ji盒he均jun有you商shang品pin供gong應ying。此ci外wai還hai可ke利li用yong酶mei標biao或huo熒ying光guang標biao記ji的de抗kang細xi胞bao因yin子zi單dan克ke隆long抗kang體ti，原yuan位wei檢jian測ce因yin子zi在zai細xi胞bao內nei的de合he成cheng及ji分fen布bu情qing況kuang，如ru近jin來lai來lai發fa展zhan起qi來lai的de細xi胞bao內nei染ran色se法fa和he酶mei聯lian免mian疫yi斑ban點dian(ELISPOT)技術等。免疫學檢測法可直接測定樣品中特定細胞因子的含量(用ng/ml表示)，為(wei)大(da)規(gui)模(mo)檢(jian)測(ce)臨(lin)床(chuang)病(bing)人(ren)血(xue)清(qing)中(zhong)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)含(han)量(liang)提(ti)供(gong)了(le)方(fang)便(bian)。本(ben)法(fa)僅(jin)測(ce)定(ding)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)抗(kang)原(yuan)性(xing)，與(yu)該(gai)因(yin)子(zi)活(huo)性(xing)不(bu)一(yi)定(ding)相(xiang)平(ping)行(xing)，因(yin)此(ci)要(yao)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)生(sheng)物(wu)學(xue)效(xiao)應(ying)
，必(bi)須(xu)結(jie)合(he)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)測(ce)法(fa)。

 

三、分子生物學方法

 

zheshiyileiliyongxibaoyinzidejiyintanzhenjiancetedingxibaoyinzijiyinbiaodadejishu。muqiansuoyougongrendexibaoyinzidejiyinjunyikelonghua，gunengjiaorongyididedaomouyixibaoyinzidecDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細胞因子mRNA表達的方法多種多樣，常使用斑點雜交、Northern blot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。實驗的關鍵在於製備高質量的核酸探針和獲得合格的待測物(提取的mRNA樣品或細胞/組織標本)。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標記物(如生物素、地高辛等)標記並與目的基因互補的DNA  片段或單鏈DNA、RNA。根據其來源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用於斑點雜交及Northern blot，而RNA探針因穿透性好更適用於原位雜交。核酸探針技術的應用已經程序化，以cDNA探針為例主要包括：①質粒DNA的提取；②靶DNA  片段的分離；③靶DNA  片段標記；④待測樣品mrna的提取；⑤標記cDNA探針對待檢樣品的雜交；⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用於細胞因子研究領域。該法具有靈敏
、快速等優點
，甚至從1～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA。

 

上(shang)述(shu)三(san)種(zhong)方(fang)法(fa)，各(ge)有(you)優(you)缺(que)點(dian)，可(ke)互(hu)相(xiang)彌(mi)補(bu)，在(zai)實(shi)際(ji)應(ying)用(yong)中(zhong)，可(ke)根(gen)據(ju)各(ge)自(zi)的(de)實(shi)驗(yan)目(mu)的(de)和(he)實(shi)驗(yan)室(shi)條(tiao)件(jian)進(jin)行(xing)選(xuan)擇(ze)。生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)測(ce)法(fa)比(bi)較(jiao)敏(min)感(gan)
，又(you)可(ke)直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)生(sheng)物(wu)學(xue)功(gong)能(neng)，是(shi)最(zui)可(ke)靠(kao)的(de)方(fang)法(fa)，適(shi)用(yong)於(yu)各(ge)種(zhong)實(shi)驗(yan)目(mu)的(de)，是(shi)科(ke)研(yan)部(bu)門(men)最(zui)常(chang)用(yong)的(de)技(ji)術(shu)
，但(dan)需(xu)要(yao)  zhang   期培養依賴性細胞株，檢測耗時  zhang  ，步(bu)驟(zhou)繁(fan)雜(za)，影(ying)響(xiang)因(yin)素(su)多(duo)，不(bu)容(rong)易(yi)熟(shu)練(lian)掌(zhang)握(wo)。免(mian)疫(yi)學(xue)檢(jian)測(ce)法(fa)比(bi)較(jiao)簡(jian)單(dan)，迅(xun)速(su)
，重(zhong)複(fu)性(xing)好(hao)

，但(dan)所(suo)測(ce)定(ding)的(de)隻(zhi)代(dai)表(biao)相(xiang)應(ying)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)量(liang)而(er)不(bu)代(dai)表(biao)活(huo)性(xing)，同(tong)時(shi)敏(min)感(gan)度(du)也(ye)低(di)於(yu)生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)檢(jian)測(ce)法(fa)(約低10～100倍)。分fen子zi生sheng物wu學xue法fa隻zhi能neng檢jian測ce基ji因yin表biao達da情qing況kuang，不bu能neng直zhi接jie提ti供gong有you關guan因yin子zi的de濃nong度du及ji活huo性xing等deng資zi料liao，主zhu要yao用yong於yu機ji製zhi探tan討tao。在zai檢jian測ce細xi胞bao因yin子zi時shi，必bi須xu考kao慮lv到dao細xi胞bao因yin子zi的de作zuo用yong具ju有you網wang絡luo性xing的de特te點dian，人ren們men需xu明ming確que檢jian測ce方fang法fa所suo測ce定ding的de細xi胞bao因yin子zi成cheng分fen
，並bing考kao慮lv其qi抑yi製zhi劑ji和he可ke溶rong性xing受shou體ti的de水shui平ping，將jiang各ge種zhong結jie合he使shi用yong，有you可ke能neng得de到dao較jiao為wei可ke靠kao的de結jie果guo。