jiangkangyuanjiehedaokangtiweizhujizhishangdezuijiandanfangfashijiangweizhuzhuangdaoyigecengxizhunei，jiangkangyuanrongyeliujingcengxizhu，dangkangyuanliujingcengxizhushijiehedaokangtishangerbeiguding
，zhidaoxituoshicaixituoxialai。zhezhongfangfadexiaolvshigenjukangyuanyugudingdekangtizhijiandejiechushijianjuedingde
，suoyikangyuankangtizhijiandezuoyongshijiankeyiyongdiliusueryanchang。

1．準備工作

kaishiqian

，yaokaolvcengxizhudeleixinghedaxiaoxuanzeweizhu。ruguoweizhudezhuchuangtijikuanheqianbizhaihegaodezhuchuangxituochulaidefengjian，erqiezheyangjiaorongyijiangweizhuyidaolingyigerongqizhongchucun。taikuandecengxizhudequedianshidanggaibianxituohuanchongyeshiweizhuyikuosan。

2．所需溶液和特殊設備

PBS；

簡單的層析裝置。

3．操作步驟

（1）將抗體微珠轉移到一個合適的層析柱中
，用20倍柱床體積的PBS洗脫。

（2）將抗原溶液加到層析柱中，讓溶液以一個較緩慢的速度（約lml／hr每毫升柱床體積）
，可以用一個泵控製流速。

（3）用20倍柱床體積的結合緩衝液洗滌層析柱。

此層析柱可用於進一步洗滌或洗脫。

4．常見問題

這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)最(zui)大(da)一(yi)個(ge)問(wen)題(ti)就(jiu)是(shi)某(mou)些(xie)蛋(dan)白(bai)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)結(jie)合(he)到(dao)分(fen)離(li)柱(zhu)上(shang)，這(zhe)些(xie)蛋(dan)白(bai)可(ke)以(yi)出(chu)現(xian)在(zai)洗(xi)脫(tuo)液(ye)中(zhong)，從(cong)而(er)使(shi)純(chun)化(hua)效(xiao)率(lv)降(jiang)低(di)。基(ji)質(zhi)本(ben)身(shen)和(he)抗(kang)體(ti)基(ji)質(zhi)複(fu)合(he)物(wu)具(ju)有(you)與(yu)待(dai)檢(jian)抗(kang)原(yuan)溶(rong)液(ye)中(zhong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)結(jie)合(he)的(de)表(biao)麵(mian)活(huo)性(xing)。雖(sui)然(ran)這(zhe)些(xie)反(fan)應(ying)較(jiao)正(zheng)常(chang)的(de)抗(kang)原(yuan)—kangtifanyingyaoruodeduo，dankangyuanrongyezhongrucunzaidaliangewaidefeiteyixingdanbaijiyiweizhezaiciguochengzhongjiangchanshengneizaidegaobendi。weilejinkenengjianshaofeiteyixingxifu
，keyicaiquyixiajizhongcuoshi。

首先，如采用各種親和柱純化法，所用基質的量須調整到略高於其飽和水平。保持抗體—微珠—基質的體積，使非特異性本底盡可能降低。捕獲大量抗原所需抗體—微珠基質的量與流速有關。流速較慢時，柱容量更有效，因為偶聯的抗體就有更多時間與抗原結合。

第(di)二(er)種(zhong)方(fang)案(an)是(shi)降(jiang)低(di)柱(zhu)上(shang)的(de)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附(fu)量(liang)。許(xu)多(duo)吸(xi)附(fu)到(dao)柱(zhu)基(ji)質(zhi)上(shang)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)是(shi)部(bu)分(fen)或(huo)全(quan)部(bu)變(bian)性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)。當(dang)製(zhi)備(bei)抗(kang)原(yuan)溶(rong)液(ye)時(shi)，機(ji)械(xie)性(xing)壓(ya)力(li)應(ying)盡(jin)可(ke)能(neng)小(xiao)，並(bing)避(bi)免(mian)過(guo)度(du)與(yu)空(kong)氣(qi)接(jie)觸(chu)。降(jiang)低(di)抗(kang)體(ti)柱(zhu)上(shang)非(fei)特(te)異(yi)結(jie)合(he)的(de)一(yi)種(zhong)較(jiao)好(hao)的(de)方(fang)法(fa)是(shi)將(jiang)抗(kang)原(yuan)溶(rong)液(ye)通(tong)過(guo)一(yi)個(ge)未(wei)與(yu)抗(kang)體(ti)偶(ou)聯(lian)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)柱(zhu)，此(ci)層(ceng)析(xi)柱(zhu)應(ying)與(yu)抗(kang)體(ti)—微珠基質柱體積相同或更大。另外一種引起非特異性結合的因素來自小顆粒碎片被阻留在柱基質上。將抗原溶液經過100 000g離心30min
，可以去除製品中大多數較大的凝聚物。

第三種降低本底的方法是用緩衝液洗滌層析柱以去除非特異性蛋白。任何不幹擾抗原抗體反應的緩衝液都可以用於阻止非特異性結合。