抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類
，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關的Ig主要為 IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈是相同的
，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結構不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。

重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區
，分別用VH和VL表示。兩者構成抗體的抗原結合部位，隻與相應的抗原決定簇匹配，發生特異性結合，是抗體專一性結合抗原的結構基礎。

IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區段
，其中兩個相同的區段稱抗原結合片段（Fab）。每個Fab都保存結合抗原的能力，但隻有一個抗原結合位點，是單價的，與抗原結合後不出現凝集或沉澱。另一區段稱Fc段，無抗體活性，但具有IgG有的抗原性。

IgG可被胃蛋白酶分解為兩個片段，一個Fab雙體
，稱F（ab'）2
，能和兩個相同的抗原結合；另一片段類似Fc，隨後被分解成小分子多肽，無生物活性。

IgM是由五個單體組成的五聚體，含 10個重鏈和10個輕鏈
，具有10個抗原結合價
，由於空間位置的影響
，隻表現為五個抗原結合價。IgM分子量約為900000，IgG分子量約為150000。

機體被微生物感染後
，先產生IgM抗體，然後產生IgG抗體。經過一段時間，IgM抗體量逐漸減少而消失，而IgG抗體可長期存在，在疾病愈後可持續數年之久。

IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性。因此IgM抗體的測定，對某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價值。

抗原抗體反應:

1.可逆性

抗原與抗體結合形成抗原抗體複合物的過程是一種動態平衡
，其反應式為：

Ag+Ab→Ag・Ab

抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結合力
，可以用平衡常數K表示：

K=[Ag・Ab]／[Ag][Ab]

Ag・Ab的解離程度與K值zhi有you關guan。高gao親qin和he力li抗kang體ti的de抗kang原yuan結jie合he點dian與yu抗kang原yuan的de決jue定ding簇cu在zai空kong間jian構gou型xing上shang非fei常chang適shi合he，兩liang者zhe結jie合he牢lao固gu，不bu易yi解jie離li。解jie離li後hou的de抗kang原yuan或huo抗kang體ti均jun能neng保bao持chi原yuan有you的de結jie構gou和he活huo性xing
，因yin此ci可ke用yong親qin和he層ceng析xi法fa來lai提ti純chun抗kang原yuan或huo抗kang體ti。在zai抗kang血xue清qing中zhong
，特te異yi性xing的deIgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體
，應用於免疫測定中可得到更好的效果。

2.最適比例

在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體複合物（沉澱）的量可繪製成一個曲線。曲線的高峰部分是抗原抗體比例最合適的範圍，稱為等價帶（zone of equivalence）。在等價帶前後分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體極度過剩
，則無沉澱物形成，在免疫測定中稱為帶現象（zone phenomenon）。抗體過量稱為前帶（prezone），抗原過量稱為後帶（postzone）。在用免疫學方法測定抗原時，應使反應係統中有足夠的抗體量，否則測得的量會小於實際含量
，甚至出現假陰性。

3. 特異性

kangyuankangtidejieheshizhishangzhifashengzaikangyuandekangyuanjuedingcuyukangtidekangyuanjieheweidianzhijian。youyuliangzhezaihuaxuejiegouhekongjiangouxingshangchenghubuguanxi
，suoyikangyuankangtifanyingjuyougaodudeteyixing。liruyiganbingduzhongdebiaomiankangyuan（ HBsAg）
、e抗原（HBeAg）和核心抗原（HBcAg），suilaiyuanyutongyibingdu
，danjinyuqixiangyingdekangtijiehe，erbuyulingwailiangzhongkangtifanying。kangyuankangtifanyingdezhezhongteyixingshimianyicedingnengzaiyifeichangfuzadedanbaizhihuahewu（例如血清）中測定某一特定的物質
，而不需先分離待檢物。

但是這種特異性也不是絕對的。假使兩種化合物有著部分相同的結構
，在抗原抗體反應中可出現交叉反應。例如：絨毛膜促性腺激素（hCG）和黃體生成激素（LH）均由α和β兩個亞單位組成，其結構的不同處在β亞單位
，而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體，抗α-hCG抗體將與LH中的α酶位發生交叉反應。在臨床檢驗中，如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG
，隻能用於hCG濃度較高的試驗，否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發生交叉反應。因此在作為早孕診斷（敏感度應達到50 mIu/ml hCG）的實驗中必須應用隻對hCG特異的抗β-hCG，以避免與其它激素的交叉反應的發生。

4.敏感性

在測定血清中某一物質的含量時

，化學比色法的敏感度為mg/ml水平
，酶反應測定法的敏感度約為5~10 μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數千倍，達ng/ml水平。例如

，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg
，其敏感度可達0.1ng/ml。

免疫測定在臨床檢驗中的應用：

由you於yu各ge種zhong抗kang原yuan成cheng份fen，包bao括kuo小xiao分fen子zi的de半ban抗kang原yuan
，均jun可ke用yong以yi製zhi備bei特te異yi性xing的de抗kang血xue清qing或huo單dan克ke隆long抗kang體ti
，利li用yong此ci抗kang體ti作zuo為wei試shi劑ji就jiu可ke檢jian測ce標biao本ben中zhong相xiang應ying的de抗kang原yuan，因yin此ci免mian疫yi測ce定ding的de應ying用yong範fan圍wei極ji廣guang
，在zai臨lin床chuang檢jian驗yan中zhong可ke用yong於yu測ce定ding：

1)  體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等。

2)  激素，包括小分子量的甾體激素等。

3)  抗生素和藥物。

4)  病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。

5)  另外
，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。

5. 標記的免疫測定

如上所述
，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應後直接測定形成的沉澱或濁度

，敏感度可達5~10 μg/ml
，danzailinchuangjianyanzhong，mouxiedaicewuzaibiaobenzhongdehanliangyuandiyuzheyishuiping，yinciyaoxunzhaozengjiamingandudefangfa。biaojidemianyicedingshijiangjianceshijizhongdekangyuanhuokangtiyongkeweiliangcedingdewuzhijiayibiaoji，tongguocedingbiaojiwulaitigaomingandu。zaifangshemianyicedinghemeimianyicedingzhong，biaojiwufenbieweifangshexinghesuhemei，zuihouyongcedingfangshexinghemeihuolilaijisuandaijianwudeliang，mingandukebizhijiecedingchendianwutigaoshubaizhishuqianbei。zaibiaojimianyicedingzhong，yibanjiaruguoliangdebiaojishijiyibaozhengyudaicewufanying。yibiaojikangti（Ab ※）檢測抗原（Ag）為例


，反應式如下：

Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※

在反應產物中有與Ag結合的Ab※和遊離和Ab※ ，如(ru)不(bu)將(jiang)兩(liang)者(zhe)分(fen)離(li)而(er)測(ce)定(ding)標(biao)記(ji)物(wu)，測(ce)得(de)的(de)結(jie)果(guo)將(jiang)為(wei)兩(liang)者(zhe)之(zhi)和(he)。因(yin)此(ci)，遊(you)離(li)標(biao)記(ji)物(wu)與(yu)結(jie)合(he)標(biao)記(ji)物(wu)的(de)分(fen)離(li)是(shi)標(biao)記(ji)免(mian)疫(yi)測(ce)定(ding)中(zhong)的(de)重(zhong)要(yao)步(bu)驟(zhou)。可(ke)采(cai)用(yong)多(duo)種(zhong)手(shou)段(duan)，固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)是(shi)其(qi)中(zhong)之(zhi)一(yi)。如(ru)將(jiang)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)，然(ran)後(hou)再(zai)與(yu)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)直(zhi)接(jie)反(fan)應(ying)
，結(jie)合(he)的(de)標(biao)記(ji)物(wu)被(bei)固(gu)定(ding)在(zai)載(zai)體(ti)上(shang)
，而(er)遊(you)離(li)的(de)標(biao)記(ji)物(wu)留(liu)於(yu)溶(rong)液(ye)中(zhong)。這(zhe)樣(yang)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)洗(xi)滌(di)將(jiang)遊(you)離(li)的(de)Ab※除去，結合標記物的測定可在固相上進行。

6.酶免疫測定

酶免疫測定（enzymeimmunoassay）可分為均相（homogenous）和非均相（heterogenous）兩種類型。在均相EIA中zhong可ke不bu進jin行xing遊you離li的de和he結jie合he的de標biao記ji物wu的de分fen離li而er直zhi接jie測ce定ding標biao記ji物wu。例li如ru在zai某mou種zhong條tiao件jian下xia，抗kang原yuan抗kang體ti反fan應ying後hou形xing成cheng的de酶mei標biao記ji抗kang原yuan抗kang體ti複fu合he物wu中zhong的de酶mei失shi去qu其qi對dui底di物wu作zuo用yong的de活huo力li，因yin而er測ce出chu的de酶mei活huo力li直zhi接jie反fan映ying遊you離li的de酶mei標biao記ji物wu。均jun相xiangEIA在臨床檢驗中較少應用。非均相EIA需先進行遊離的和結合的標記物的分離。如前所述，固相載體可用作一種分離手段。這種固相酶免疫測定方法在1971年最初建立時稱為酶聯免疫吸附劑測定（enzymelinked immunosorbent assay），簡稱ELISA，在國內有譯作酶聯免疫吸附試驗的，雖然含義不全確切，但已習用。