在ELISAdeyanfazhibeizhongyouweizhongyaodejiushitadezhikongliucheng,baokuokangyuanshejijizhibeishaixuan,kangtizhibei,biaozhunpindedingliang,jianceyedeyouhua,shijihedezuzhuang,yijigezhongxingnengdeyanzheng。duiyukeyangongzuozhelaishuo,yaozhibeiyigehaodeELISA kit,需要具備敏感性高,特異性強,重複性好,並且其試劑穩定、易保存,操作簡便等。下麵來看一下ELISA的質控控製。
1. 抗原抗體選擇
ELISAjianceyuanlijiyukangyuankangtifanying,qizhiliangyingxiangleshijihedexingneng。duiyudafenzidanbaikangyuan,duocaiyongshuangkangtijiaxinfa,shiyongyoudekangtidui,qiezhishaoyouyizhongweidankang,peiduishaixuanzuijiaxinzaobidebaobeihejiancekangti。duiyukangyuanweiduotaihexiaofenzi(或者偶聯物),多采用競爭抑製法,抗體的是經過驗證的單克隆抗體或者多克隆抗體。
2. 標準品
對(dui)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)定(ding)量(liang)的(de)準(zhun)確(que)性(xing),每(mei)個(ge)公(gong)司(si)對(dui)於(yu)定(ding)量(liang)標(biao)準(zhun)和(he)方(fang)法(fa)可(ke)能(neng)會(hui)有(you)不(bu)同(tong),這(zhe)是(shi)企(qi)業(ye)標(biao)準(zhun)。試(shi)劑(ji)盒(he)使(shi)用(yong)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)多(duo)為(wei)重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)或(huo)者(zhe)單(dan)價(jia)的(de)小(xiao)分(fen)子(zi), 定量可參考國際標準品,國家標準物質信息網或者一些大公司,如R&D, Abcam等。標準品的定量直接會決定試劑盒最後樣本的檢測結果。
3. 天然樣本驗證分析
我們在選擇樣本時,避免使用有外源性汙染的樣本,避免血樣本出現溶血、細菌汙染,最好使用較新鮮樣本,避免反複凍融。
血清是最為常見的檢測樣本,但是大約40%的血清標本中含有非特異性幹擾物質,可以不同程度影響檢測結果;常見的幹擾物質有:類風濕因子RF、補體、交叉反應物質和異嗜性抗體等其他物質等。避免其發生的方法有:
①標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理。
②用2-C2H6OS加入到標本稀釋液中使RF降解。
③56℃ 30 min加熱血清使補體滅活。
在樣本檢測中,稀釋對於實驗的成功也至關重要,稀釋過度以及稀釋不足均有可能導致樣本的測值低。Elisa 實shi驗yan較jiao為wei常chang見jian的de一yi個ge現xian象xiang就jiu是shi鉤gou狀zhuang效xiao應ying,即ji抗kang原yuan與yu抗kang體ti比bi例li不bu合he適shi而er導dao致zhi假jia陰yin性xing的de現xian象xiang,抗kang原yuan過guo量liang稱cheng為wei後hou帶dai效xiao應ying。當dang樣yang本ben中zhong目mu標biao物wu含han量liang很hen高gao,而er沒mei有you進jin行xing正zheng確que的de稀xi釋shi,就jiu有you可ke能neng會hui導dao致zhi假jia陰yin性xing反fan應ying。
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