了解生化分析儀基本參數的原理，有利於儀器、試劑的正確使用，有助於正確分析和處理測定數據。但是

，配套係統的原裝分析參數不宜更改
；采用非儀器配套的試劑及校準品體係時
，參數修改要慎重

，對於不同儀器、不同類型的反應分析程序，所顯示的人機對話分析參數信息有所不同。

一、反應監測時間

對(dui)於(yu)終(zhong)點(dian)法(fa)來(lai)說(shuo)，讀(du)取(qu)反(fan)應(ying)達(da)到(dao)平(ping)衡(heng)時(shi)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中(zhong)待(dai)測(ce)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)。對(dui)於(yu)連(lian)續(xu)監(jian)測(ce)法(fa)來(lai)說(shuo)，要(yao)注(zhu)意(yi)觀(guan)察(cha)反(fan)應(ying)進(jin)程(cheng)曲(qu)線(xian)
，從(cong)而(er)確(que)定(ding)反(fan)應(ying)的(de)預(yu)孵(fu)育(yu)期(qi)，延(yan)遲(chi)時(shi)間(jian)
、連續監測的時段。對於一級或偽一級反應來說
，連續監測的時間是一級反應的動態期的吸光度；duiyujiyulingjifanyingdemeicuihuahuoxingnongdusulvfaceding，lianxujiancedeshilingjixianxingfanyingqidexiguangdu。duiyulianxujiancefalaishuo
，dongtaifanyingqideshijianyuechang
，yueshiyongyulinchuangyingyong，duiyuyimeiweigongjudedaixiewumeicudonglicedingfa
，yaozengjiadongtaifanyingqi
，jiyanchangfanyingdadaopinghengdeshijian
，kezaifanyingtixizhongjiarujingzhengxingyizhiji
，zheyanghaikeyitigaocedingdexianxingfanwei，duiyumeicuihuahuoxingnongdulianxujiancefalaishuo，yidingyaozhuyixianxingfanyingshijian，youdemei
，liru，yiliudaidingxiandanjianweidiwudexueqingjiaxingdanjianzhimeisulvcedingfa，xianxingfanyingshijianzhiyou90秒。對於連續監測法來說，在監測期至少應讀4個點(3個△A)。

多數全自動生化分析儀可以在整個測定反應周期連續監測(如HITACHI 7170常規測定周期10分鍾、監測34點
，OLYMPUS AU 600固定周期8分15秒、監測27點)
，但反應監測時間是指該時間內的測定讀數要用於結果計算。它的設置與加樣點
、加試劑點(包括R1
、R2……)、監測時間(讀數點)
、讀數間隔時間及試劑樣品比例等有關
，要結合方法學

，兼顧權衡。

1．反應時間(Reaction Time)  指(zhi)儀(yi)器(qi)的(de)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)，試(shi)劑(ji)和(he)樣(yang)品(pin)混(hun)合(he)最(zui)末(mo)一(yi)點(dian)測(ce)定(ding)讀(du)數(shu)時(shi)間(jian)。它(ta)對(dui)終(zhong)點(dian)法(fa)尤(you)其(qi)重(zhong)要(yao)
，是(shi)終(zhong)點(dian)法(fa)的(de)瓶(ping)頸(jing)。有(you)的(de)儀(yi)器(qi)多(duo)個(ge)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)可(ke)選(xuan)L如Hl—TACHI 7170)
，須預先選定。多數儀器10分鍾左右，這對試劑提出了較高要求。不少終點法試劑(尤其手工法試劑)反應時間常常也在lO分(fen)鍾(zhong)上(shang)下(xia)，測(ce)定(ding)時(shi)間(jian)沒(mei)有(you)餘(yu)地(di)
，當(dang)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)高(gao)或(huo)試(shi)劑(ji)質(zhi)量(liang)下(xia)降(jiang)時(shi)，均(jun)可(ke)致(zhi)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)偏(pian)低(di)。因(yin)此(ci)，終(zhong)點(dian)法(fa)不(bu)宜(yi)采(cai)用(yong)標(biao)明(ming)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)接(jie)近(jin)和(he)長(chang)於(yu)儀(yi)器(qi)最(zui)大(da)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)的(de)試(shi)劑(ji)盒(he)。否(fou)則(ze)，必(bi)須(xu)用(yong)接(jie)近(jin)測(ce)定(ding)範(fan)圍(wei)上(shang)限(xian)的(de)高(gao)濃(nong)度(du)質(zhi)控(kong)血(xue)清(qing)監(jian)測(ce)。

2．監測時間(讀數點)和(he)讀(du)數(shu)間(jian)隔(ge)時(shi)間(jian)各(ge)類(lei)型(xing)儀(yi)器(qi)不(bu)盡(jin)一(yi)致(zhi)。離(li)心(xin)式(shi)生(sheng)化(hua)儀(yi)讀(du)數(shu)間(jian)隔(ge)時(shi)間(jian)短(duan)，監(jian)測(ce)時(shi)間(jian)也(ye)短(duan)。流(liu)動(dong)式(shi)生(sheng)化(hua)儀(yi)讀(du)數(shu)間(jian)隔(ge)時(shi)間(jian)一(yi)般(ban)較(jiao)長(chang)。分(fen)立(li)式(shi)生(sheng)化(hua)儀(yi)一(yi)般(ban)監(jian)測(ce)時(shi)間(jian)10分鍾左右，間隔10-30秒讀數一次。有的儀器在整個測定反應周期全程讀數，有的隻讀取指定時間(點)的吸光度。   

3．加試劑點采用雙試劑時，加R2點決定R1與樣品的反應時間，也決定R2與R1及樣品的反應時間。一般儀器各5分鍾左右。HITACHI 7170有4個加試劑點
，若采用雙試劑
，各5分鍾，則加R2設在第3加試劑點。

4．反應監測時間還要考慮延遲時間的長短、測定物質的濃度範圍及相關臨床價值和工作效率等因素。

二、延遲時間

延遲時間(Delay Time)指試劑與樣品混合後到監測開始之間的時間。一般用於兩點法和速率法，某些情況下也用於終點法。終點法應選擇反應趨於平衡的時間(穩定期或平衡期)zuoceding，cedingdianqianjisuoweidefuyuqi。sulvfadexianxingfanyingqizhiqianjiyanchiqi。zhengquexuanzeyanchishijiandechangduan，youliyuzhunqueceding
，jianshaoshiyanwucha。shezhiyibangenjushijihedeshuomingshu
，haiyingkaolvbenshideyiqitedianhegongzuochengxu。

1．儀器特點  比如
，半自動生化儀多為流動比色池，要考慮泵速
、進樣管長短、反應液黏稠度及混合情況，以及室溫
、反應液溫度同反應要求溫度間的溫差等。全自動生化儀的測定讀數設置方式不同，直接以“秒”設置
，或以測定點設置
、測定點間隔時間不一樣
，需要靈活掌握。

2．試劑及方法學

(1)試劑組成在酶活性的連續監測法時
，若試劑含工具酶數量多
、偶聯反應多，則激活反應時間一般較長，延遲時間也較長，如肌酸激酶(NAC法)延遲時間常設置120-180秒；若試劑中底物經待測酶催化
，其產物可以直接測定的
，則延遲時間較短，如 -穀氨酰轉移酶(GGT)設定30-60秒。同一項目同一方法，但試劑配方不同，其反應快慢等特征也可能不同

，如白蛋白測定。白蛋白與溴甲酚綠(BCG)為即時反應

，10秒鍾內已完成
，其後球蛋白等也將與BCG發生反應
，所以孵育時間不能延長。但在同一測定時間，BcG濃度、緩衝液種類、pH和表麵活性劑不J司的試劑
，測定結果可能差異明顯。

(2)樣品異常成分幹擾有的試驗項目需要用工具酶將內源性代謝產物耗盡
，比如丙氨酸氨基轉移酶活性測定試劑中須有足量的乳酸脫氫酶(LDH)。如果使用單試劑
，正常血清樣品延遲時間60秒即可；但當內源性酮酸增多(如酮症酸中毒)時，試劑內LDH常常不能在60秒內完全將其清除
，剩餘酮酸會進入監測期幹擾測定，使測定結果偏高，所以延遲時間應增至90～120秒。采用雙試劑，則可在加入R1後即進入預孵育期。

(3)方法學要求比如肌酐(Jaffe法)測定的特異性不強
，一般認為反應前20秒左右為乙酰乙酸等快反應幹擾物呈色，後約80～100秒為蛋白質等慢反應假肌酐呈色

，20~60秒miao肌ji酐gan呈cheng色se反fan應ying占zhan主zhu導dao地di位wei。采cai用yong兩liang點dian法fa或huo速su率lv法fa可ke減jian少shao幹gan擾rao，但dan具ju體ti取qu多duo長chang的de延yan遲chi時shi間jian，應ying根gen據ju試shi劑ji和he儀yi器qi讀du數shu特te點dian，以yi幹gan擾rao試shi驗yan等deng方fang法fa來lai評ping價jia決jue定ding。

3.工作程序 要yao在zai保bao證zheng準zhun確que性xing的de前qian提ti下xia，合he理li設she置zhi參can數shu
，提ti高gao工gong作zuo效xiao率lv。最zui突tu出chu的de例li子zi是shi半ban自zi動dong生sheng化hua儀yi上shang酶mei活huo性xing連lian續xu監jian測ce法fa的de延yan遲chi時shi間jian設she定ding。由you於yu隻zhi能neng單dan份fen樣yang品pin逐zhu一yi測ce定ding
，若ruo延yan遲chi時shi問wen全quan部bu設she置zhi在zai儀yi器qi內nei，每mei個ge延yan遲chi時shi間jian加jia監jian測ce時shi間jian至zhi少shao1分鍾以上
，守候時間較長。工作量大時，可以根據儀器控溫、加樣及讀數和試劑特點，以及室溫情況
，將延遲時問挪一部分到機外
，套式操作，但要確保機內延遲時間不要進入線性反應期。

4．要yao兼jian顧gu延yan遲chi時shi間jian和he監jian測ce時shi間jian反fan應ying時shi間jian是shi有you限xian製zhi的de。在zai速su率lv法fa和he兩liang點dian法fa中zhong
，延yan長chang延yan遲chi時shi間jian必bi然ran縮suo短duan線xian性xing監jian測ce期qi，減jian少shao測ce定ding的de線xian性xing範fan圍wei，也ye易yi發fa生sheng底di物wu耗hao盡jin。

三、樣品量、試劑量與稀釋量

有關參數包括樣品量、試劑量、稀釋水量、最小反應體積和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反應體積180~380µl，最大體積570µ l。BT 224半自動生化儀流動比色池容積33µl
，吸液量200～990µl
，最適體積500µl。

1．最小反應體積   zaiyiqiguangdudushuyaoyongyujieguojisuanshi
，fanyingyeyemiangaodubudiyuguangdujiguangjingdezuixiaotiji。tabaozhengyiqidezhengquedushuhejisuan
，yeshiyiqicedingjingduhejingjixingdezhizhenzhiyi。zaiyoudeyiqizhong，tayifanyingtijidexiaxianbiaoshi，youdezezhuanmenbiaomingzuixiaofanyingtiji。zaidanshijicedingzhong，yangpinyushijidezongtijibudeshaoyucicanshu。zaishuangshijicedingzhong
，ruoR1與樣品的反應讀數不納入結果計算。R1自勺加液量可不考慮此參數，如連續監測法；否則應考慮它對結果的影響
，如終點法在加R2之前讀數，並以此來扣除試劑或樣品空白時。

在半自動生化儀中，最適吸人量相當於最少反應體積。它與進液管道長度、liudongbisechirongji，xiyebengchouxilidaxiaoheyetinianchouduyouguan，tayaobaozhengguangdujiancebushoukongpaoheqianhouyangpinxiedaiwurandeganrao。yinci，xirentijibunengrenyijiangdi，biyaoshi，yingjiadafanyingyelianghexirenliang。

2．最大比色杯容量   這(zhe)個(ge)參(can)數(shu)含(han)義(yi)明(ming)確(que)。在(zai)有(you)的(de)儀(yi)器(qi)中(zhong)，它(ta)以(yi)反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)的(de)上(shang)限(xian)表(biao)示(shi)，有(you)的(de)則(ze)專(zhuan)門(men)標(biao)明(ming)最(zui)大(da)比(bi)色(se)杯(bei)容(rong)量(liang)。反(fan)應(ying)液(ye)超(chao)過(guo)此(ci)體(ti)積(ji)，將(jiang)致(zhi)液(ye)體(ti)外(wai)溢(yi)，儀(yi)器(qi)測(ce)定(ding)係(xi)統(tong)被(bei)汙(wu)損(sun)。

3．樣品試劑比例樣品與試劑的比例(SV：RV)，也可表示為樣品體積分數——樣品體積與反應液總體積的比值(SV／TV)
，是方法學基本參數。酶活力測定中
，樣品在總體積中的比例應在10％以下。一般來說
，待測物質在樣品中含量低的、生理波動範圍大的，樣品用量較大。如Trinder反應測定血清葡萄糖
、膽固醇等，樣品試劑比例多為1：1OO，測定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇，常增加為1：50
；ALT和AST的樣品試劑比例多為1：1O至1：20。方法靈敏、吸光度高的實驗方法，樣品試劑比例小,如白蛋白BCG法，樣品試劑比例常為1：200。肌酐Jaffe氏法監測時間短
、吸光度值較低，樣品試劑比例多為1：10。一般應以試劑說明為準
，不宜輕易改動。

(1)改動樣品試劑比例
，影響一係列方法學參數。若比例增大，則線性範圍縮小，線性反應時間縮短
，樣品內源性幹擾、基質效應增加
、旁路反應會增強，方法特異性也下降。若比例減少，檢測信號偏低

，信噪比(噪音／信號)增大，當儀器精度不高時，會加大測量誤差。

(2)改動樣品試劑比例
，對某些反應有影響。如堿性磷酸酶(AI_P)，有文獻報道：當樣品試劑比例從1：25降至1：50時，酶活力測定值增加，再低於1：50時不再增加。這一效應可能是較高稀釋度下AIJP多聚體解聚的結果。體液樣品稀釋也可能對測定結果產生影響：④大多數蛋白質在濃溶液中的分子構象比稀溶液中穩定，樣品稀釋可影響酶的穩定性。(2)jiangdiyangpinzhongneiyuanxingyizhijihuojidongjidenongdu，ruyizhengliushuixishixueqing，kenengyinjiangdixueqingzhongdianfenmeidejidongjilvlizidenongdu，zhicedingdianfenmeijieguopiandi；隨血清稀釋倍數增加，肌酸激酶測定活力增加，可能與降低樣品中AMt，、胱氨酸等內源性抑製劑有關。

(3)雙試劑時要兼顧R1、R2和樣品三者的比例，尤其不宜改動試劑間的比例。R2要考慮儀器規定的加液最小體積，同一試劑瓶死體積下分液量小而浪費大的經濟問題等。

4．稀釋(水)量在加樣或加試劑時，加入去離子水或可以指定的液體。它的主要用途有兩個。一是用於濃縮試劑的稀釋
，或樣品、校準品的稀釋。二是在樣品加量小的時候用來衝洗樣品探針，減小攜帶誤差；但(dan)用(yong)量(liang)不(bu)宜(yi)太(tai)多(duo)，以(yi)免(mian)稀(xi)釋(shi)試(shi)劑(ji)影(ying)響(xiang)反(fan)應(ying)。要(yao)把(ba)稀(xi)釋(shi)水(shui)量(liang)納(na)入(ru)樣(yang)品(pin)試(shi)劑(ji)比(bi)例(li)和(he)反(fan)應(ying)液(ye)總(zong)體(ti)積(ji)考(kao)慮(lv)。必(bi)要(yao)時(shi)，幹(gan)粉(fen)試(shi)劑(ji)複(fu)溶(rong)也(ye)要(yao)考(kao)慮(lv)此(ci)因(yin)素(su)。

四、試劑空白(Reagent blank)監測參數

無(wu)樣(yang)品(pin)或(huo)以(yi)水(shui)代(dai)替(ti)樣(yang)品(pin)在(zai)反(fan)應(ying)過(guo)程(cheng)中(zhong)觀(guan)察(cha)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)值(zhi)或(huo)其(qi)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，主(zhu)要(yao)用(yong)於(yu)監(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)質(zhi)量(liang)及(ji)儀(yi)器(qi)穩(wen)定(ding)性(xing)，利(li)用(yong)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)對(dui)試(shi)劑(ji)本(ben)身(shen)或(huo)反(fan)應(ying)漂(piao)移(yi)引(yin)起(qi)的(de)誤(wu)差(cha)進(jin)行(xing)補(bu)償(chang)
，用(yong)以(yi)校(xiao)正(zheng)△A或△A/min。它與測定波長、光徑大小
、不同試劑及配方和樣品試劑比例等有關，不能盲目套用
，必要時宜實際測定。

1．shijixiguangdushangxianhexiaxiandingdianjianceshijidexiguangdu。tachangyongguidingbochangjiguangjingxiadexiguangduzhibiaoshi。yiqideshijikongbaijiancedianyinyiqihecedingfangfadebutongeryouchayi。zhongdianfachangzaiPO點dian讀du數shu，連lian續xu監jian測ce法fa常chang以yi反fan應ying監jian測ce起qi始shi點dian來lai判pan讀du。儀yi器qi在zai試shi劑ji空kong白bai檢jian測ce及ji相xiang關guan的de校xiao準zhun測ce定ding時shi，若ruo監jian測ce到dao超chao過guo此ci參can數shu的de限xian值zhi，則ze提ti示shi試shi劑ji失shi效xiao或huo校xiao準zhun無wu效xiao。反fan應ying吸xi光guang度du向xiang上shang的de試shi驗yan取qu上shang限xian值zhi：如Trinder反應以酚或2-羥-3，5-二氯苯磺酸等和4-氨基安替比林作用，生成紅色色素，試劑有一定的自發氧化，其試劑一般要求試劑吸光度上限≤0. 1-0. 4。以結合型硝基苯衍生物作為底物的ALP和GGT常要求≤0.6~0.8。反應吸光度向下的試驗取下限值：如以NADH或NADPH為輔酶的ALT和Urea(紫外法)等試驗，一般要求試劑吸光度下限≥1．0。

2．試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)速(su)率(lv)顧(gu)名(ming)思(si)義(yi)
，它(ta)是(shi)在(zai)反(fan)應(ying)過(guo)程(cheng)中(zhong)對(dui)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)的(de)變(bian)化(hua)速(su)率(lv)作(zuo)連(lian)續(xu)監(jian)測(ce)
，其(qi)數(shu)值(zhi)在(zai)樣(yang)品(pin)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)中(zhong)自(zi)動(dong)扣(kou)除(chu)。試(shi)劑(ji)中(zhong)可(ke)能(neng)混(hun)有(you)的(de)其(qi)他(ta)雜(za)酶(mei)或(huo)幹(gan)擾(rao)物(wu)對(dui)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)速(su)率(lv)有(you)影(ying)響(xiang)。在(zai)酶(mei)促(cu)反(fan)應(ying)中(zhong)，試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)速(su)率(lv)也(ye)是(shi)試(shi)劑(ji)在(zai)監(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)中(zhong)底(di)物(wu)自(zi)發(fa)降(jiang)解(jie)的(de)結(jie)果(guo)。底(di)物(wu)為(wei)還(hai)原(yuan)型(xing)輔(fu)酶(mei)者(zhe)，本(ben)身(shen)不(bu)穩(wen)定(ding)而(er)分(fen)解(jie)，多(duo)呈(cheng)下(xia)降(jiang)趨(qu)勢(shi)；以yi硝xiao基ji苯ben酚fen或huo苯ben胺an的de衍yan生sheng物wu作zuo底di物wu，在zai堿jian性xing環huan境jing中zhong自zi發fa水shui解jie成cheng被bei測ce物wu質zhi，多duo呈cheng上shang升sheng趨qu勢shi。此ci參can數shu主zhu要yao用yong於yu連lian續xu監jian測ce法fa。一yi般ban認ren為wei酶mei活huo性xing測ce定ding的de試shi劑ji空kong白bai速su率lv(△A/min)應≤0. 001~0.003。由於試劑空白速率與儀器檢測下限、正常參考範圍下限等指標有關，有時也以濃度單位表示。要根據K值
、儀器穩定性
、方法允許變異而定。例如
，ALT或AST40U/L以下活力濃度的分析誤差應≤10％，其試劑空白速率應≤4．0U／L。一些儀器的程序參數中沒有此參數，但我們應在試劑空白的測定資料中關注它，若資料波動大，須查找試劑或儀器原因。

3．試shi劑ji空kong白bai的de日ri常chang監jian測ce測ce定ding方fang法fa設she置zhi了le試shi劑ji空kong白bai的de項xiang目mu，都dou要yao先xian行xing作zuo試shi劑ji空kong白bai測ce定ding，在zai樣yang品pin測ce定ding計ji算suan中zhong自zi動dong扣kou除chu。由you於yu試shi劑ji空kong白bai不bu是shi在zai每mei一yi個ge樣yang品pin測ce定ding中zhong實shi時shi測ce定ding並bing扣kou除chu，當dang樣yang品pin測ce定ding中zhong試shi劑ji的de變bian化hua在zai未wei達da到dao參can數shu設she置zhi限xian值zhi時shi不bu易yi發fa現xian，試shi劑ji空kong白bai扣kou除chu會hui產chan生sheng誤wu差cha。所suo以yi
，應ying根gen據ju試shi劑ji的de穩wen定ding性xing確que定ding試shi劑ji空kong白bai及ji相xiang關guan的de校xiao準zhun的de測ce定ding頻pin率lv。連lian續xu監jian測ce法fa的de試shi劑ji應ying每mei天tian(尤其在換另瓶或另批號試劑時)常規測定此參數。對樣品的異常結果．也應及時對其測定吸光度資料(包括與試劑空白有關的資料，例如PO點讀數)觀察分析。

4.youdebanzidongshenghuayimeiyoushijixiguangdushangxianhexiaxiansheding，danyibanzaicedingpingmudouxianshichushixiguangduzhi，yingrengongjiayipanduan。meihuolicedingjieguochengfuzhi，youshikenengyushijikongbaicuowuyouguan。

5．試(shi)劑(ji)吸(xi)光(guang)度(du)上(shang)限(xian)和(he)下(xia)限(xian)不(bu)是(shi)試(shi)劑(ji)質(zhi)量(liang)的(de)唯(wei)一(yi)指(zhi)針(zhen)。因(yin)此(ci)，一(yi)定(ding)的(de)校(xiao)準(zhun)頻(pin)率(lv)和(he)室(shi)內(nei)質(zhi)控(kong)是(shi)質(zhi)量(liang)保(bao)證(zheng)的(de)必(bi)需(xu)手(shou)段(duan)。我(wo)們(men)在(zai)實(shi)際(ji)工(gong)作(zuo)中(zhong)就(jiu)遇(yu)到(dao)酶(mei)活(huo)力(li)測(ce)定(ding)的(de)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)數(shu)據(ju)在(zai)規(gui)定(ding)限(xian)值(zhi)內(nei)，但(dan)質(zhi)控(kong)物(wu)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)連(lian)續(xu)偏(pian)低(di)，病(bing)人(ren)結(jie)果(guo)因(yin)每(mei)天(tian)標(biao)本(ben)少(shao)而(er)難(nan)以(yi)判(pan)斷(duan)
，最(zui)後(hou)發(fa)現(xian)是(shi)試(shi)劑(ji)質(zhi)量(liang)下(xia)降(jiang)。

五
、波長的選擇及測定模式

波長（Wave 1ength)的正確選擇有利於提高測定的靈敏度和減少測定誤差。光度學方法有單波長和雙波長之分
，有的儀器可用三波長、甚至多波長，以及兩波長比率等。有的儀器可作導數光譜分析。單波長測定易受樣品溶血
、黃疸、脂(zhi)濁(zhuo)等(deng)因(yin)素(su)幹(gan)擾(rao)。雙(shuang)波(bo)長(chang)測(ce)定(ding)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)副(fu)波(bo)長(chang)加(jia)以(yi)修(xiu)正(zheng)，減(jian)少(shao)甚(shen)至(zhi)消(xiao)除(chu)幹(gan)擾(rao)因(yin)素(su)，提(ti)高(gao)測(ce)定(ding)準(zhun)確(que)性(xing)。采(cai)用(yong)同(tong)光(guang)束(shu)雙(shuang)波(bo)長(chang)
，亦(yi)有(you)利(li)於(yu)排(pai)除(chu)光(guang)源(yuan)強(qiang)度(du)變(bian)化(hua)對(dui)結(jie)果(guo)的(de)影(ying)響(xiang)。

1．測定波長選擇有三個主要條件：

(1)待測物質在該波長下的光吸收最大。

(2)其吸收峰宜較寬而鈍，而不是處於尖峰或陡肩，一般不選光譜中的末端吸收峰
，換句話說，該吸收峰處的吸光度隨波長變化較小。

(3)常chang見jian幹gan擾rao物wu在zai該gai波bo長chang下xia的de光guang吸xi收shou最zui小xiao。試shi劑ji盒he說shuo明ming一yi般ban已yi提ti供gong波bo長chang參can數shu。實shi際ji波bo長chang選xuan擇ze需xu要yao了le解jie待dai測ce物wu質zhi和he幹gan擾rao組zu分fen對dui不bu同tong波bo長chang單dan色se光guang的de吸xi收shou程cheng度du，即ji以yi波bo長chang為wei橫heng坐zuo標biao、吸光度為縱坐標作吸收光譜曲線(光吸收曲線)。

采用透射免疫比濁法，免疫複合物大小約35~100mn之間
，於波長290~410nm下有最大吸收峰，常取340nm；如用膠乳增強免疫濁度法，理想的檢測波長可增至可見光區。

2．雙波長測定當待測物質與幹擾組分的吸收光譜互相重疊、出現非特異光吸收

，或因反應液混濁出現光散射時，可以采用雙波長(或多波長)測定。雙波長測定的原則是根據幹擾組分和待測物質吸收光譜的峰形特征，選擇兩個波長和 
，shiganraozufenzaizhelianggebochangchudexiguangxishuxiangdeng，ershidaicewuzhizailiangbochangchudexiguangxishuyouxianzhuchabie。yiliangbochangfenbiecedingfenxirongyedexiguangdu，yilianggexiguangduzhizhicha(△A)計算。雙波長選擇常見：血紅蛋白340nm和380nm波長吸光度相同

，以NADH或NADPH作為測定底物或產物的試驗常采用340／380nm；有的也．采用340／405nm。ALP和GGT常使405/476nm，Trinder反應多選取520／600nm或550/660nm．免疫比濁常選用340／700nm等。

連續監測法中，要注意雙波長測定有兩種類型的機型：主波長全程監測副波長單點監測，和雙波長全程監測。不僅因為後者的準確性優於前者，而且因為酶活性測定的K值計算與波長及摩爾吸光係數有關

，更顯重要。

副波長單點監測：試劑和樣品混合後，雙波長隻測一點，此後隻用主波長連續監測
；計算時，全部x主吸光度值均減去同一λ副吸光度值。K值計算代入主波長摩爾吸光係數即可。機型如Monarch 1000 ，Technicon RA 1000等。

雙波長全程監測：全程每～測定點均用雙波長同測，並各自用λ主吸光度值減去λ副吸光度值。因為所測指示酶或產物在λ副波長時也存在一定的吸光係數

，K值計算代入的摩爾吸光係數值應采用ε主減去ε副。如NADH的ε 為6．22×10 ， 為1．33×10 ，ALP產物ε 為18.5x×10 ，ε 為0.2×10 很小；GGT產物在副波長處無吸光係數。