PCR( Polymerase Chain Reaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應完成後，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降後，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環可以重複多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。PCR檢測試劑盒反應失敗的原因及解決方法如下：

一 、模板質量問題：

1.模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑個電泳看看提取的DNA
，PCR陽性樣品與陰性樣品是否有明顯差別。如果確定是這種問題
，可以增加模板量試試

，但不一定行得通。

2.模板裏麵殘留某種試劑成份，可能抑製Taq聚合酶的活性，如果是這種情況，可以用試劑盒把模板再純化一下，或將模板做個梯度稀釋以確定最佳的模板量。

3.為什麼跑電泳會出現拖帶呢？

（1）有(you)可(ke)能(neng)的(de)因(yin)為(wei)你(ni)的(de)電(dian)壓(ya)調(tiao)的(de)太(tai)高(gao)了(le)。電(dian)泳(yong)跟(gen)很(hen)多(duo)因(yin)素(su)有(you)關(guan)
，其(qi)中(zhong)就(jiu)有(you)一(yi)個(ge)是(shi)電(dian)壓(ya)，在(zai)適(shi)當(dang)的(de)電(dian)壓(ya)範(fan)圍(wei)內(nei)增(zeng)加(jia)是(shi)可(ke)以(yi)加(jia)快(kuai)遷(qian)移(yi)速(su)率(lv)，但(dan)是(shi)要(yao)是(shi)超(chao)到(dao)一(yi)個(ge)臨(lin)界(jie)值(zhi)反(fan)而(er)有(you)害(hai)。你(ni)可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)調(tiao)低(di)點(dian)看(kan)看(kan)。
（2）有時候發現上樣量太多的話會有拖帶。你看能否回收之後 ，按1:50 或1:100 等稀釋後
，再當成模板擴一次怎麼樣。

二 、引物問題
1.樣yang品pin自zi身shen的de基ji因yin型xing差cha異yi導dao致zhi擴kuo增zeng失shi敗bai。也ye就jiu是shi說shuo你ni的de引yin物wu與yu某mou些xie基ji因yin型xing的de樣yang品pin結jie合he的de好hao
，而er和he另ling一yi些xie基ji因yin型xing結jie合he不bu好hao。可ke以yi換huan一yi對dui更geng保bao守shou的de引yin物wu試shi試shi。祝zhu順shun利li！
2.普通PCRsuoyongdeyiduiyinwuzhongyouyigeyinwujiaduole，weizhengchangdesanbeizhiyaoyinwuteyixingbijiaohao，namebuhuichanshengdadeyingxiang。ruguoqiaqiaoshijiaduodezhetiaoyinwubushihenteyidehua，yexuhuikuochulaifeiteyidai。

三、Taq酶處於失活狀態。因為活性降低了能出現二聚體。

四、模板濃度過低。

五
、退火溫度過高。可以做個梯度PCR試一下。

六、循環次數過少或延伸時間過短以致目的基因擴增量不夠。這個可能性不大。

七
、dNTP濃度低時PCR產率及特異性均增高，適合於用擴增摻入法標記生物素及放射性元素。當100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L時就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,會很影響PCR結果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑製。

八、PCR產物電泳
1.電泳圖不清晰，可能電泳緩衝液和製膠緩衝液濃度不準或者髒了吧。換新的電泳緩衝液和製膠緩衝液試試。marker都出問題說明是膠的問題
，或者電泳操作的問題。
2. PCR擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由於酶量過多或酶的質量差，dNTP濃度過高，Mg²⁺濃度過高，退火溫度過低，循環次數過多引起。