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優化ELISA的(de)重(zhong)點(dian)之(zhi)一(yi)在(zai)於(yu)洗(xi)滌(di)。洗(xi)滌(di)步(bu)驟(zhou)可(ke)降(jiang)低(di)未(wei)結(jie)合(he)抗(kang)體(ti)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)背(bei)景(jing)信(xin)號(hao)，從(cong)而(er)增(zeng)加(jia)分(fen)析(xi)的(de)信(xin)噪(zao)比(bi)。每(mei)一(yi)步(bu)之(zhi)間(jian)的(de)洗(xi)滌(di)確(que)保(bao)隻(zhi)有(you)特(te)異(yi)的(de)結(jie)合(he)事(shi)件(jian)被(bei)保(bao)留(liu)，在(zai)最(zui)後(hou)一(yi)步(bu)產(chan)生(sheng)信(xin)號(hao)。不(bu)充(chong)分(fen)的(de)洗(xi)滌(di)會(hui)導(dao)致(zhi)差(cha)異(yi)和(he)高(gao)背(bei)景(jing)，從(cong)而(er)帶(dai)來(lai)不(bu)理(li)想(xiang)的(de)結(jie)果(guo)。在(zai)做(zuo)ELISA實驗時，洗板操作合乎要求，能得到正確、可靠的結果。
ELISA試驗過程中洗板機洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機洗板時應注意以下三個關鍵點。
1.洗滌參數
主zhu要yao的de參can數shu是shi洗xi滌di量liang。自zi動dong洗xi板ban機ji會hui分fen配pei洗xi滌di液ye。如ru果guo你ni之zhi前qian遭zao遇yu過guo高gao背bei景jing，那na麼me不bu要yao猶you豫yu，將jiang洗xi滌di量liang調tiao為wei高gao，最zui好hao是shi比bi包bao被bei體ti積ji更geng高gao。太tai少shao的de洗xi滌di液ye會hui讓rang一yi部bu分fen分fen析xi表biao麵mian洗xi滌di不bu到dao，從cong而er明ming顯xian增zeng加jia背bei景jing。所suo有you反fan應ying孔kong的de洗xi滌di量liang必bi須xu相xiang同tong。
ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
2.洗滌次數
影(ying)響(xiang)洗(xi)滌(di)效(xiao)果(guo)的(de)主(zhu)要(yao)參(can)數(shu)是(shi)洗(xi)滌(di)循(xun)環(huan)的(de)量(liang)。當(dang)然(ran)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)越(yue)多(duo)，背(bei)景(jing)越(yue)低(di)。然(ran)而(er)，太(tai)多(duo)次(ci)的(de)洗(xi)滌(di)會(hui)降(jiang)低(di)信(xin)號(hao)強(qiang)度(du)，使(shi)其(qi)難(nan)以(yi)測(ce)定(ding)。通(tong)常(chang)的(de)做(zuo)法(fa)是(shi)在(zai)每(mei)次(ci)抗(kang)體(ti)或(huo)抗(kang)原(yuan)孵(fu)育(yu)後(hou)重(zhong)複(fu)洗(xi)滌(di)三(san)次(ci)。不(bu)過(guo)，一(yi)般(ban)而(er)言(yan)，包(bao)被(bei)平(ping)板(ban)需(xu)要(yao)的(de)洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)比(bi)用(yong)戶(hu)包(bao)被(bei)的(de)平(ping)板(ban)要(yao)少(shao)。對(dui)於(yu)用(yong)戶(hu)包(bao)被(bei)的(de)ELISA板，必須優化洗滌次數。
控製洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過，有些自動化洗板機可設置程序，分配遠遠超出這個量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢?其qi實shi很hen簡jian單dan，就jiu是shi在zai分fen液ye的de同tong時shi打da開kai吸xi液ye功gong能neng。換huan句ju話hua說shuo，隨sui著zhe分fen液ye器qi分fen配pei更geng多duo的de液ye體ti，抽chou吸xi器qi也ye將jiang液ye體ti吸xi出chu。這zhe種zhong技ji術shu能neng增zeng加jia洗xi滌di量liang，但dan不bu會hui溢yi出chu到dao其qi他ta孔kong中zhong。
3.抽吸
還有一些參數會影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調整，以降低背景(殘留量)和差異。
殘留液體中包含未結合的抗原或抗體，它們會增加背景信號。殘留量越小，殘留液體越少，轉移到下一步的幹擾液體也就越少。
吸液高度會明顯影響殘留量;如(ru)果(guo)洗(xi)滌(di)吸(xi)頭(tou)與(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)底(di)部(bu)的(de)距(ju)離(li)稍(shao)大(da)，那(na)就(jiu)會(hui)讓(rang)殘(can)留(liu)量(liang)急(ji)劇(ju)增(zeng)加(jia)。反(fan)之(zhi)，如(ru)果(guo)洗(xi)滌(di)吸(xi)頭(tou)壓(ya)著(zhe)反(fan)應(ying)孔(kong)底(di)部(bu)，那(na)麼(me)也(ye)會(hui)使(shi)吸(xi)液(ye)效(xiao)率(lv)降(jiang)低(di)，殘(can)留(liu)量(liang)增(zeng)加(jia)。
目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭：剛(gang)性(xing)和(he)浮(fu)動(dong)。浮(fu)動(dong)洗(xi)頭(tou)中(zhong)的(de)吸(xi)頭(tou)可(ke)在(zai)洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中(zhong)自(zi)由(you)上(shang)下(xia)移(yi)動(dong)，而(er)剛(gang)性(xing)洗(xi)頭(tou)則(ze)固(gu)定(ding)在(zai)適(shi)當(dang)的(de)位(wei)置(zhi)。使(shi)用(yong)剛(gang)性(xing)洗(xi)頭(tou)的(de)洗(xi)滌(di)操(cao)作(zuo)在(zai)優(you)化(hua)起(qi)來(lai)更(geng)為(wei)複(fu)雜(za)，因(yin)為(wei)你(ni)需(xu)要(yao)非(fei)常(chang)仔(zai)細(xi)地(di)調(tiao)整(zheng)吸(xi)液(ye)高(gao)度(du)。如(ru)果(guo)你(ni)們(men)實(shi)驗(yan)室(shi)使(shi)用(yong)幾(ji)種(zhong)不(bu)同(tong)的(de)板(ban)，那(na)可(ke)能(neng)會(hui)很(hen)耗(hao)時(shi)。在(zai)使(shi)用(yong)浮(fu)動(dong)洗(xi)頭(tou)時(shi)，吸(xi)頭(tou)會(hui)降(jiang)到(dao)反(fan)應(ying)孔(kong)的(de)底(di)部(bu)。調(tiao)整(zheng)高(gao)度(du)就(jiu)不(bu)是(shi)很(hen)重(zhong)要(yao)，因(yin)此(ci)洗(xi)頭(tou)會(hui)下(xia)降(jiang)到(dao)底(di)部(bu)。
抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔隻使用一個抽吸點(這很常見，因為更快)，那(na)麼(me)抽(chou)吸(xi)的(de)位(wei)置(zhi)需(xu)要(yao)優(you)化(hua)。最(zui)佳(jia)的(de)位(wei)置(zhi)取(qu)決(jue)於(yu)洗(xi)頭(tou)的(de)性(xing)狀(zhuang)，但(dan)它(ta)幾(ji)乎(hu)不(bu)在(zai)反(fan)應(ying)孔(kong)的(de)中(zhong)間(jian)，即(ji)使(shi)這(zhe)是(shi)所(suo)有(you)洗(xi)頭(tou)最(zui)常(chang)見(jian)的(de)默(mo)認(ren)位(wei)置(zhi)。一(yi)般(ban)來(lai)說(shuo)，最(zui)佳(jia)位(wei)置(zhi)在(zai)孔(kong)中(zhong)間(jian)與(yu)孔(kong)壁(bi)之(zhi)間(jian)的(de)某(mou)處(chu)。
反應孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
