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在一般分光光度計的使用說明書上，要求儀器預熱時間約20分鍾；若是帶微處理器的分光光度計，開機後儀器自動進入自檢(初始化)狀態，約需10分鍾左右。
在分光光度計預熱這個環節上，很多使用者或多或少存在問題，如開機隻預熱電路係統 (不調節波長、打開吸收池暗箱蓋預熱等)或認為初始化過程就是預熱等。
對帶微處理器有自檢功能的分光光度計，開機後儀器自檢 (初始化)結束後，在測定窗口上，設置所需波長值， 用一個吸收池裝上純淨水置於光路上，調 “0000A”後，預熱儀器，當儀器顯示讀數不再變化後即可進行測定。
對於紫外可見分光光度計，由於有雙光源 (鎢燈與氘燈)，為了延長燈的使用壽命，開機自檢完成後可以關掉測定時不用的光源燈。
分光光度計在測定過程中，發現同一個溶液在不同時間裏其測定結果不同，即重複性不好，其原因是什麼?排除測定錯誤因素外，可能原因有：
(1)儀器預熱時間不夠或預熱方法不對所造成，應延長預熱時間或采用正確的預熱方法。
(2)光電轉換器 (如光電管)因長時間使用其光電轉換 效率發生了變化導致。這時標準溶液與待測溶液的吸光度都 同樣變低，在相對定量時對結果影響很小。但是對這類儀器，一般建議連續使用時間不應超過3h，若需長時間使用，最好間歇30min 。
樣品室的主要作用就是放置樣品，液體測試一般使用比色皿，比色皿分為石英和玻璃兩種，玻璃比色皿主要用於可見區（320nm-2500nm），在紫外區有吸收，不適用於紫外區，石英比色皿可以用於紫外可見近紅外區（190nm-2500nm），另外有些透明有機玻璃也可以用作吸收池。
（1）比色皿上方通常會有字母標識，各型號標識稍有差別，玻璃比色皿口沿處有“G”(Glass 玻璃) ，而石英比色皿口沿處有“Q”(Quartz 石英) 或者 “S”（Silicide石英玻璃）。
（2）使用紫外可見光分光光度計來鑒別玻璃、石英比色皿：現行國家檢定規程規定石英比色皿在250nm下吸光度應小於0.07abs，若吸光度大於0.07abs 則為玻璃比色皿。
使用需要配對的比色皿，在可適用的相同波長下，以空氣或者純水為介質，使用透光率T進行測量，將每組比色皿中的一隻透射率調為100%，然後測量另外一隻透光率，凡透射率之差不超過0.5%T，即可配對使用。
比(bi)色(se)皿(min)是(shi)分(fen)析(xi)過(guo)程(cheng)中(zhong)對(dui)結(jie)果(guo)有(you)很(hen)大(da)影(ying)響(xiang)的(de)一(yi)個(ge)因(yin)素(su)，比(bi)色(se)皿(min)汙(wu)染(ran)之(zhi)後(hou)對(dui)測(ce)試(shi)的(de)影(ying)響(xiang)更(geng)大(da)，會(hui)使(shi)測(ce)試(shi)不(bu)穩(wen)定(ding)甚(shen)至(zhi)結(jie)果(guo)不(bu)準(zhun)，因(yin)此(ci)完(wan)成(cheng)樣(yang)品(pin)測(ce)定(ding)之(zhi)後(hou)，必(bi)須(xu)徹(che)底(di)清(qing)洗(xi)比(bi)色(se)皿(min)，下(xia)列(lie)清(qing)洗(xi)流(liu)程(cheng)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)：蒸餾水清洗――乙醇清洗――幹燥。
如果比色皿被汙染，請按照如下流程清洗：在洗滌劑中浸泡約10min（30-50℃）――蒸餾水清洗――再加有少量雙氧水的稀硝酸中浸泡約30min――蒸餾水清洗――幹燥。
注：如果比色皿被有機物汙染，請先用如丙酮等有機溶劑將有機物洗去並用蒸餾水清洗。
值得注意的是：分(fen)析(xi)實(shi)驗(yan)常(chang)用(yong)的(de)鉻(ge)酸(suan)洗(xi)液(ye)不(bu)宜(yi)用(yong)於(yu)比(bi)色(se)皿(min)洗(xi)滌(di)，這(zhe)是(shi)因(yin)為(wei)帶(dai)水(shui)的(de)比(bi)色(se)皿(min)在(zai)該(gai)洗(xi)液(ye)中(zhong)可(ke)能(neng)會(hui)產(chan)生(sheng)熱(re)量(liang)，致(zhi)使(shi)比(bi)色(se)皿(min)膠(jiao)接(jie)麵(mian)裂(lie)開(kai)而(er)損(sun)壞(huai)。同(tong)時(shi)經(jing)洗(xi)液(ye)洗(xi)滌(di)後(hou)的(de)比(bi)色(se)皿(min)還(hai)可(ke)能(neng)殘(can)存(cun)微(wei)量(liang)鉻(ge)(鉻在紫外區有吸收) ，因此會影響實驗的測定。
1、使用的吸收池必須潔淨，並注意配對使用。量瓶、移液吸管均應校正、洗淨後使用。
2、取吸收池時，手指應拿毛玻璃麵的兩側，裝盛樣品以池體的4/5為(wei)度(du)，使(shi)用(yong)揮(hui)發(fa)性(xing)溶(rong)液(ye)時(shi)應(ying)加(jia)蓋(gai)，透(tou)光(guang)麵(mian)要(yao)用(yong)擦(ca)鏡(jing)紙(zhi)由(you)上(shang)而(er)下(xia)擦(ca)拭(shi)幹(gan)淨(jing)，檢(jian)視(shi)應(ying)無(wu)溶(rong)劑(ji)殘(can)留(liu)。吸(xi)收(shou)池(chi)放(fang)入(ru)樣(yang)品(pin)室(shi)時(shi)應(ying)注(zhu)意(yi)方(fang)向(xiang)相(xiang)同(tong)。用(yong)後(hou)用(yong)溶(rong)劑(ji)或(huo)水(shui)衝(chong)洗(xi)幹(gan)淨(jing)，晾(liang)幹(gan)防(fang)塵(chen)保(bao)存(cun)。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時除另有規定外，應以配製供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm石英吸收池，在規定的吸收峰±2nm以yi內nei，測ce幾ji個ge點dian的de吸xi收shou度du或huo由you儀yi器qi在zai規gui定ding的de波bo長chang附fu近jin自zi動dong掃sao描miao測ce定ding，以yi核he對dui供gong試shi品pin的de吸xi收shou峰feng位wei置zhi是shi否fou正zheng確que，並bing以yi吸xi收shou度du最zui大da的de波bo長chang作zuo為wei測ce定ding波bo長chang，除chu另ling有you規gui定ding外wai吸xi收shou度du最zui大da波bo長chang應ying在zai該gai品pin種zhong項xiang下xia規gui定ding的de測ce定ding波bo長chang±2nm以內。
5、供試品應取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應取2份。並進行平行操作，每份結果與平均值的偏差應在±0.5%以內。
6、xuanyongyiqidexiafengkuanduyingxiaoyugongshipinxishoudaidebankuandu，fouzecededexishouduzhihuipiandi，xiafengkuandudexuanzeyingyijianshaoxiafengkuandushigongshipindexishoudubuzaizengjiaweizhun，duiyudabufenbeicepinzhong，keyishiyong2nm縫寬。
1、若實驗中需大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡後，重新校正“0”和“100%”點。然後再測量。
2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位於零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調零。
3、比色皿使用完畢後，請立即用蒸餾水衝洗幹淨，並用幹淨柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表麵光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、一般的分光光度計，由於其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數大，因而可以用於檢測微弱光 電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露於光下，因此在 預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光杆，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩。
6、放大器靈敏度換擋後，必須重新調零。
7、比色杯必須配套使用，否則將使測試結果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。具體方法如下：
分別向被測的兩隻杯子裏注入同樣的溶液，把儀器置於某一波長處。 將某一個池的透射比值調至100%，測量其它各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的範圍內則可以配套使用，若超出此範圍應考慮其對測試結果的影響。
