C18的選用主要考慮2個問題,即柱填料和柱規格對色譜柱的影響。
1.1 C18柱的填料對色譜柱的影響
柱填料的物理性能對填料色譜行為有重要影響。填料主要的物理性能包括如下:顆粒度、孔徑、孔體積、鍵合相化學、含碳量及烷基化處理。
(1)顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小。實際上色譜柱上所標的粒徑是一個平均值。如粒徑“5μm”並不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm,實shi際ji上shang有you一yi個ge顆ke粒li分fen布bu度du。這zhe種zhong分fen布bu度du對dui柱zhu反fan壓ya及ji柱zhu效xiao有you重zhong要yao作zuo用yong。一yi般ban來lai說shuo,平ping均jun顆ke粒li度du越yue小xiao,顆ke粒li分fen布bu度du越yue小xiao,色se譜pu柱zhu效xiao越yue高gao,反fan壓ya亦yi越yue高gao。目mu前qianC18柱填料粒徑在4~10μm之間
(2)kongjingshizhitianliaokelijiandekongjianxi。yibansuoshuodekongjingshizhitianliaodepingjunkongjing。qiuxingtianliaozhuangzhuhoupingjunkongjingfenbubijiaozhai,zhuchuangjiegoujunyun,zhuxiaogao,zhongxianxinghao;wudingxingtianliaopingjunkongjingfenbujiaokuan,zhuchuangjiegoubujunyun,liudongxiangxianxingsudubujunyun,pudaikuokuan。pingjunkongjingdedaxiaoduifenlidafenzihuahewuyoujiaodadeyingxiang,zaifenlihanyoujiaodafenzideyangpinshikenenghuiyoufenzipaizuxiaoying,huochanshengxifuxiaoyingcongeryingxiangdingliangdehuishoulvjizhunquedu。yinerzaiyongfanxiangsepufenlizhurudanbaihuoduotaiyangpinshiyingkaolvxuanyongdakongjing(如30 nm)的反相柱填料。孔體積作為矽膠多孔性的參數,在分離分析較大分子化合物時可作參考,選用較大孔體積的反相柱填料。
(3)化(hua)學(xue)鍵(jian)合(he)相(xiang)填(tian)料(liao)在(zai)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)中(zhong)占(zhan)有(you)極(ji)重(zhong)要(yao)的(de)地(di)位(wei)。它(ta)可(ke)以(yi)鍵(jian)合(he)極(ji)性(xing)較(jiao)大(da)的(de)有(you)機(ji)基(ji)團(tuan),采(cai)用(yong)極(ji)性(xing)較(jiao)小(xiao)的(de)溶(rong)劑(ji)作(zuo)流(liu)動(dong)相(xiang)。亦(yi)可(ke)鍵(jian)合(he)極(ji)性(xing)較(jiao)小(xiao)的(de)有(you)機(ji)基(ji)團(tuan),選(xuan)用(yong)極(ji)性(xing)較(jiao)大(da)的(de)溶(rong)劑(ji)作(zuo)流(liu)動(dong)相(xiang)。C18色譜柱是以矽烷化鍵合型(Si-O-Si-C)存在的,這類鍵合反應目前應用最為普遍。如以十八烷基三氯矽烷與全多孔型矽膠M-Porasil-C18反應生成烷基化學鍵合相,商品名為M-Bondapak-C18。
(4)tanhanliangjitianliaozhongdehantanliang。chuantongdeceliangjishushijiangtianliaojiaredaotanqingjianduanlie,ranhoutongguocedingsunshidezhonglianghuoxingchengdeeryanghuatanlaijisuantanhanliang。keyitongguozengjiatanjiandechangduhuozengjiajianhemidulaizengjiatanhanliang。tanhanliangzengjia,zhuzidebaoliuzhizengjia。jianhexiangdesepuxingweiyujianhemiduyouguan,yeyuguijiaodemidujitianliaodebiaomianjiyouguan,tianliaodemiduyuegao,tianzhusuoxudeguijiaoliangyueduo,zhuzidehantanliangyeyuegao。ruguoyong2種不同密度相同碳含量的填料填充柱子,其保留行為將明顯不同。因此,單獨以碳含量來預測色譜行為是不夠的。
(5)C18矽烷化試劑是一個大於2nm大分子,因此會與已鍵合在相鄰的矽醇基上的C18guiwanhuashijichanshengyanzhongdelitiweizu。qijieguodaozhizaiguijiaobiaomianyoudaliangdecanliuguichunjimeiyouyuguiwanhuashijifanying,zhexiejixingdeguichunjizaiyidingseputiaojianxiahuiyujianxinghuahewuxianghuzuoyongyinqifengxingtuowei,congerkeyingxiangdingliangfenxijieguo。zhexiewentizaiyidingchengdushangkeyitongguowanjihuachulijiayikefu。wanjihuachulishizaijianhexiangshangwanchengdedulifanying,yijianshaozaiguijiaobiaomiandeguichunji。wanjihuachulicaiyongxiaofenzi(如三甲矽烷)的試劑,其空間位阻遠小於C18基團。大多數固定相僅有30%可覆蓋的鍵合位置。據報道,通過某些極活躍的化學試劑及特殊的反應條件,最高的覆蓋量可達50%。很好地了解矽膠鍵合相的物理特性將有助於在高效液相色譜的反應中選擇合適的色譜柱。表麵上看C18柱雖然化學官能團相同,而實際上不同品牌的C18柱性能可能有很大差別,從而產生不同的分離結果。
1.2 C18柱的規格對色譜柱的影響
柱填料的選擇關係到色譜分離的可能性,而柱規格的選擇直接影響分析速度、分離能力、檢測能力及每次分析的溶劑消耗等。柱規格包括兩方麵:柱內徑和柱長度。柱內徑,分析型一般為2~6 mm,製備型20 mm,大者可達80 mm;柱長度,分析型5~30 cm,製備型15~50 cm。一yi般ban來lai說shuo,柱zhu內nei徑jing不bu影ying響xiang分fen離li度du與yu分fen析xi時shi間jian的de關guan係xi。今jin天tian,柱zhu技ji術shu已yi發fa展zhan到dao不bu同tong柱zhu內nei徑jing的de柱zhu子zi能neng夠gou具ju有you相xiang同tong的de性xing能neng。不bu同tong內nei徑jing的de柱zhu子zi又you各ge具ju特te點dian,對dui相xiang同tong的de分fen析xi時shi間jian和he分fen離li度du來lai說shuo,內nei徑jing大da的de柱zhu子zi比bi內nei徑jing小xiao的de柱zhu子zi多duo消xiao耗hao溶rong劑ji。另ling一yi方fang麵mian,較jiao小xiao內nei徑jing的de柱zhu子zi對dui相xiang同tong的de檢jian測ce信xin號hao來lai說shuo所suo需xu樣yang品pin量liang亦yi較jiao少shao。因yin此ci,在zai樣yang品pin量liang有you限xian時shi,可ke使shi用yong小xiao內nei徑jing柱zhu。柱zhu長chang度du增zeng加jia雖sui可ke改gai善shan分fen離li效xiao果guo,但dan阻zu力li也ye隨sui之zhi增zeng加jia,必bi須xu提ti高gao入ru口kou壓ya力li。柱zhu壓ya是shi同tong時shi影ying響xiang增zeng加jia分fen離li度du和he減jian少shao分fen析xi時shi間jian的de主zhu要yao障zhang礙ai。分fen離li度du、分析時間及柱壓三者相互製約,選擇好其中兩者,則第3個因素也就選好了。長柱可以給出高分離度,短柱可提供快速分離,我們可以根據樣品情況去選用合適的色譜柱。
1.3 C18柱選用的基本原則
(1)選用經過烷基化處理封口的填料可防止堿性化合物的拖尾現象。
(2)選用含碳量高的柱子,增加保留值。
(3)選用較短的柱子(如15 cm,7.5 cm)。
(4)選用小顆粒度的填料。
(5)對分子量大的組分選用大孔徑填料的柱子。
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