凝ning膠jiao色se譜pu法fa又you稱cheng分fen子zi排pai阻zu色se譜pu法fa。凝ning膠jiao色se譜pu法fa主zhu要yao用yong於yu高gao聚ju物wu的de相xiang對dui分fen子zi質zhi量liang分fen級ji分fen析xi以yi及ji相xiang對dui分fen子zi質zhi量liang分fen布bu測ce試shi。根gen據ju分fen離li的de對dui象xiang是shi水shui溶rong性xing的de化hua合he物wu還hai是shi有you機ji溶rong劑ji可ke溶rong物wu,又you可ke分fen為wei凝ning膠jiao過guo濾lv色se譜pu(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。
根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。
凝膠過濾色譜:
凝膠過濾色譜一般用於分離水溶性的大分子,如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖係列,洗脫溶劑主要是水。
凝膠滲透色譜:
凝膠滲透色譜法主要用於有機溶劑中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分布分析及分離,常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。
凝ning膠jiao色se譜pu不bu但dan可ke以yi用yong於yu分fen離li測ce定ding高gao聚ju物wu的de相xiang對dui分fen子zi質zhi量liang和he相xiang對dui分fen子zi質zhi量liang分fen布bu,同tong時shi根gen據ju所suo用yong凝ning膠jiao填tian料liao不bu同tong,可ke分fen離li油you溶rong性xing和he水shui溶rong性xing物wu質zhi,分fen離li相xiang對dui分fen子zi質zhi量liang的de範fan圍wei從cong幾ji百bai萬wan到dao100以下。
近(jin)年(nian)來(lai),凝(ning)膠(jiao)色(se)譜(pu)也(ye)廣(guang)泛(fan)用(yong)於(yu)分(fen)離(li)小(xiao)分(fen)子(zi)化(hua)合(he)物(wu)。化(hua)學(xue)結(jie)構(gou)不(bu)同(tong)但(dan)相(xiang)對(dui)分(fen)子(zi)質(zhi)量(liang)相(xiang)近(jin)的(de)物(wu)質(zhi),不(bu)可(ke)能(neng)通(tong)過(guo)凝(ning)膠(jiao)色(se)譜(pu)法(fa)達(da)到(dao)完(wan)全(quan)的(de)分(fen)離(li)純(chun)化(hua)的(de)目(mu)的(de)。
凝膠色譜法又稱體積排阻色譜法,使用水溶液流動相的稱為凝膠過濾色譜,使用有機溶劑流動相的稱為凝膠滲透色譜。凝膠色譜的固定相是多孔物質,如多孔凝膠、交聯聚苯乙烯、duokongbolijiduokongguijiaodeng。shiyangshianzhaoqizhonggezufenfenzidaxiaodebutongerfenlide。dayutianliaoweikongdefenzi,youyubunengjinrutianliaoweikong,erzhijietongguozhuzi,Z先流出柱外,在色譜圖上Z早出現,小於填料微孔的組分分子,可以滲透到微孔中不同的深度,相對分子質量Z小的組分,保留時間Z長。
凝膠色譜與凝膠層析是否一樣?
jibenshangshiyizhidezhishigudingxiangcunzaichayi。ningjiaosepufayouchengfenzipaizusepufa。ningjiaosepuzhuyaoyongyugaojuwudexiangduifenzizhiliangfenjifenxiyijixiangduifenzizhiliangfenbuceshi。
凝膠層析又稱分子篩過濾、排阻層析,操作條件比較溫和,可在相當廣的溫度範圍下進行,並且對分離成分理化性質的保持有獨到之處。
兩者的共同點是都不需要有機溶劑。凝膠色譜色譜一般用在HPLC等分析場合。而凝膠層析一般用在製備的時候。
凝膠淨化柱和凝膠色譜柱是一回事嗎?
原理是一回事,都是排阻色譜。 但是前者是製備柱,對大量樣品進行分離,柱子口徑大,一般要有切割承樣的尾接裝置;後者是分析柱,主要目的是對小量樣品進行分析,柱子直徑小,一般還有柱溫箱,對泵的穩定性要求高,必須接檢測器。
1、Sephadex G交聯葡聚糖的商品名為Sephadex,不同規格型號的葡聚糖用英文字母G表示,G後麵的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克,同樣G-200克每克幹膠吸水20克。交聯葡聚糖凝膠的種類有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G-150,和G-200。因此,“G”反映,凝膠的交聯程度,膨脹程度及分部範圍。
2、Sephadex LH-20,是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶於水及親脂溶劑,用於分離不溶於水的物質。交聯葡聚糖和瓊脂糖都是多糖類物質,防止微生物的生長,在凝膠層析中十分重要,常用的抑菌劑有:
⑴疊氨鈉(NaN3)
在凝膠層析中隻要用0.02%疊氮鈉已足夠防止微生物的生長,疊氮鈉易溶一水,在20℃時約為40%;它不與蛋白質或碳水化合物相互作用,因此疊氮鈉不影響抗體活力;不會改變蛋白質和碳水化合物的層析我特性。疊氮鈉可幹擾熒光標記蛋白質。
⑵可樂酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]
在凝膠層析中使用濃度為0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的殺菌效果Z佳,在強堿性溶液中或溫度高於60℃時易引起分解而失效。
⑶乙基汞代巰基水楊酸鈉
在凝膠層析中作為抑菌劑使用濃度為0.05-0. 01%。在微酸性溶液中Z為有效。重金屬離子可使乙基代巰基的物質結合,因而包含疏基的蛋白質可在不同程度上降低它的抑菌效果。
⑷苯基汞代鹽
在凝膠層析中使用濃度為0.001-0.01%。在微堿性溶液中抑效果Z佳,長時間放置時可與鹵素、硝酸根離子作用而產生沉澱;還原劑可引起此化合物分解;含疏基的物質亦可降低或抑製它的抑菌作用。
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