柱子可以分為:加壓,常壓,減壓。
壓ya力li可ke以yi增zeng加jia淋lin洗xi劑ji的de流liu動dong速su度du,減jian少shao產chan品pin收shou集ji的de時shi間jian,但dan是shi會hui減jian低di柱zhu子zi的de塔ta板ban數shu。所suo以yi其qi他ta條tiao件jian相xiang同tong的de時shi候hou,常chang壓ya柱zhu是shi效xiao率lv最zui高gao的de,但dan是shi時shi間jian也ye最zui長chang,比bi如ru天tian然ran化hua合he物wu的de分fen離li,一yi個ge柱zhu子zi幾ji個ge月yue也ye是shi有you的de。
減壓柱能夠減少矽膠的使用量,感覺能夠節省一半甚至更多,但是由於大量的空氣通過矽膠會使溶劑揮發(有時在柱子外麵有水汽凝結),以及有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必須同時使用水泵抽氣(很大的噪音,而且時間長)。以前曾經大量的過減壓柱,對它有比較深厚的感情,但是自從嚐試了加壓後,就幾乎再也沒動過減壓的念頭了。
加壓柱是一種比較好的方法,與常壓柱類似,隻不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵(給魚缸供氣的就行)。特te別bie是shi在zai容rong易yi分fen解jie的de樣yang品pin的de分fen離li中zhong適shi用yong。壓ya力li不bu可ke過guo大da,不bu然ran溶rong劑ji走zou的de太tai快kuai就jiu會hui減jian低di分fen離li效xiao果guo。個ge人ren覺jiao得de加jia壓ya柱zhu在zai普pu通tong的de有you機ji化hua合he物wu的de分fen離li中zhong是shi比bi較jiao適shi用yong的de。
關於柱子的尺寸,應該是粗長的最好。
柱子長了,相應的塔板數就高。柱子粗了,上樣後樣品的原點就小(反映在柱子上就是樣品層比較薄),這(zhe)樣(yang)相(xiang)對(dui)的(de)減(jian)小(xiao)了(le)分(fen)離(li)的(de)難(nan)度(du)。試(shi)想(xiang)如(ru)果(guo)柱(zhu)子(zi)十(shi)厘(li)米(mi),而(er)樣(yang)品(pin)就(jiu)有(you)二(er)厘(li)米(mi),那(na)麼(me)分(fen)離(li)的(de)難(nan)度(du)可(ke)想(xiang)而(er)知(zhi),恐(kong)怕(pa)要(yao)用(yong)很(hen)低(di)極(ji)性(xing)的(de)溶(rong)劑(ji)慢(man)慢(man)衝(chong)了(le)。而(er)如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)層(ceng)隻(zhi)有(you)0.5厘(li)米(mi),那(na)麼(me)各(ge)組(zu)分(fen)就(jiu)比(bi)較(jiao)容(rong)易(yi)得(de)到(dao)完(wan)全(quan)分(fen)離(li)了(le)。當(dang)然(ran)采(cai)用(yong)粗(cu)大(da)的(de)柱(zhu)子(zi)要(yao)犧(xi)牲(sheng)比(bi)較(jiao)多(duo)的(de)矽(gui)膠(jiao)和(he)溶(rong)劑(ji)了(le),不(bu)過(guo)這(zhe)些(xie)成(cheng)本(ben)相(xiang)對(dui)於(yu)產(chan)品(pin)來(lai)說(shuo)也(ye)許(xu)就(jiu)不(bu)算(suan)什(shen)麼(me)了(le)(有些不環保的說,不過溶劑回收重蒸後也就減小了部分浪費)。
現在見到的柱子徑高比一般在1:5~10,書中寫矽膠量是樣品量的30~40倍,具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開(是指在所需組分rf在0.2~0.4,雜質相差0.1以上),就可以少用矽膠,用小柱子(例如200毫克的樣品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我覺得可以增加柱子的直徑,比如用3cm的,也可以減小淋洗劑的極性等等關於無水無氧柱,適用於對氧,水敏感,易分解的產品。
可(ke)以(yi)濕(shi)柱(zhu),也(ye)可(ke)以(yi)幹(gan)柱(zhu)。不(bu)過(guo)在(zai)樣(yang)品(pin)之(zhi)前(qian)至(zhi)少(shao)要(yao)用(yong)溶(rong)劑(ji)把(ba)柱(zhu)子(zi)飽(bao)和(he)一(yi)次(ci),因(yin)為(wei)溶(rong)劑(ji)和(he)矽(gui)膠(jiao)飽(bao)和(he)時(shi)放(fang)出(chu)的(de)熱(re)量(liang)有(you)可(ke)能(neng)是(shi)產(chan)品(pin)分(fen)解(jie),畢(bi)竟(jing)要(yao)分(fen)離(li)的(de)是(shi)敏(min)感(gan)的(de)東(dong)東(dong),小(xiao)心(xin)不(bu)為(wei)過(guo)。也(ye)是(shi)因(yin)為(wei)分(fen)離(li)的(de)東(dong)西(xi)比(bi)較(jiao)敏(min)感(gan),所(suo)以(yi)接(jie)收(shou)瓶(ping)一(yi)定(ding)要(yao)用(yong)可(ke)密(mi)封(feng)的(de),遵(zun)循(xun)schlenk操作。至於是加壓、常壓、減壓,隨需而定。因為是schlenk操作,所以點板是個問題,如果樣品是顯色的,恭喜了,不用點板,直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無色,隻好準備幾十個schlenk瓶,一瓶一瓶的點,不過幾次之後就知道樣品在哪,也就可以省些了。像我以前過一根無水無氧柱,需要六個schlenk,現在隻一個就能把所要的全收集到。
wushuiwuyangzhuzhongyongdebijiaoduodeshiyongyanghualvzuogudingxiang。yinweiguijiaozhongyoudaliangdeqiangjiluoluzaiwai,henrongyishiyangpinfenjie,tebieshijinshuyoujihuahewuhehanlinhuahewu。eryanghualvkeyizuochengjianxing、中性和酸性的,選擇餘地比較大,但是比矽膠要貴些。
聽說有個方法,就是用石英做柱子,然後用HF254做固定相,這樣在柱子外麵用紫外燈一照就知道產品在哪裏了,沒有驗證過。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。
關於濕法、幹法上樣。
濕法省事,一般用淋洗劑溶解樣品,也可以用二氯甲烷、yisuanyizhideng,danrongjiyueshaoyuehao,buranrongjijiuchenglelinxijile。henduoyangpinzaishangzhuqianshizhanhuhude,yibanmeiguanxi。keshiyoudeshangyanghouzaiguijiaoshangyouhuixichu,zheyibandoushibijiaodaliangdeyangpincaihuichuxian,shiyinweiguijiaoduiyangpindexifubaohe,eryangpinbenshenyoushibijiaohaodeguticaihuifasheng,zhejiuyinggaixianzhongjiejing,dedaodabufendechanpinhouzaizhufen,ruguobunengzhongjiejingnajiubuguantale,zhijieguojiushile,yangpinsuizhelinxijiliudonghuirongjiede。
有些樣品溶解性差,能溶解的溶劑又不能上柱(比如DMF,DMSO等,會隨著溶劑一起走,顯色是一個很長的脫尾),這時就必須用幹法上柱了。樣品和矽膠的量有一種說法是1:1,我覺得是越少越好,但是要保證在旋幹後,不能看到明顯的固體顆粒(那說明有的樣品沒有吸附在矽膠上)。
溶劑的選擇。
當dang然ran是shi最zui便bian宜yi,最zui安an全quan,最zui環huan保bao的de了le。所suo以yi大da多duo選xuan用yong石shi油you醚mi,乙yi酸suan乙yi酯zhi。文wen獻xian中zhong有you寫xie用yong正zheng己ji烷wan的de,太tai貴gui了le,除chu非fei特te別bie需xu要yao不bu要yao用yong不bu然ran銀yin子zi嘩hua嘩hua的de,流liu的de比bi淋lin洗xi劑ji還hai快kuai,不bu過guo因yin為wei極ji性xing很hen小xiao,有you時shi還hai是shi非fei它ta不bu可ke。乙yi醚mi也ye可ke以yi用yong,但dan是shi就jiu是shi容rong易yi睡shui覺jiao,注zhu意yi保bao持chi清qing醒xing別bie讓rang溶rong劑ji流liu幹gan了le,那na樣yang柱zhu子zi也ye就jiu不bu爽shuang了le。二er氯lv甲jia烷wan也ye有you用yong的de,但dan是shi要yao知zhi道dao,它ta和he矽gui膠jiao的de吸xi附fu是shi一yi個ge放fang熱re過guo程cheng,所suo以yi夏xia天tian的de時shi候hou經jing常chang會hui在zai柱zhu子zi裏li產chan生sheng氣qi泡pao,天tian氣qi冷leng的de時shi候hou會hui好hao一yi些xie。甲jia醇chun,據ju說shuo能neng溶rong解jie部bu分fen的de矽gui膠jiao,所suo以yi產chan品pin如ru果guo想xiang過guo元yuan素su分fen析xi的de話hua要yao留liu神shen,應ying該gai經jing過guo後hou繼ji處chu理li,比bi如ru說shuo重zhong結jie晶jing等deng。其qi他ta的de溶rong劑ji用yong的de相xiang對dui較jiao少shao,要yao依yi個ge人ren的de不bu同tong需xu要yao選xuan擇ze了le。
由於某些原因,用到的淋洗劑多是大包裝的(便宜嘛),我們這裏是用10升或25shengdesuliaotongzhuangde,jiuyaozhuyizhexiegongyepindechundushijiaodide。jingchangnenggoucongsonglaidedatongdibukanjianyousedezazhi,qitadezazhijiukexiangerzhile,suoyizaibijiaoyangedezhufenshijiuyaoduirongjizhongzheng。dangranguoyuanliaoshijiukeyimianquzheyibule,fanzhengxiamianhaiyoutichundefangfa。
另(ling)外(wai)溶(rong)劑(ji)在(zai)過(guo)柱(zhu)子(zi)後(hou)最(zui)好(hao)也(ye)回(hui)收(shou)使(shi)用(yong),一(yi)方(fang)麵(mian)環(huan)保(bao),另(ling)一(yi)方(fang)麵(mian)也(ye)能(neng)節(jie)省(sheng)部(bu)分(fen)經(jing)費(fei),缺(que)點(dian)是(shi)要(yao)消(xiao)耗(hao)一(yi)定(ding)的(de)人(ren)工(gong)。這(zhe)裏(li)要(yao)注(zhu)意(yi)的(de)是(shi),一(yi)般(ban)在(zai)過(guo)柱(zhu)同(tong)時(shi)進(jin)行(xing)的(de)是(shi)減(jian)壓(ya)旋(xuan)蒸(zheng),石(shi)油(you)醚(mi)和(he)乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)的(de)比(bi)例(li)由(you)於(yu)揮(hui)發(fa)度(du)的(de)不(bu)同(tong)會(hui)導(dao)致(zhi)極(ji)性(xing)的(de)變(bian)化(hua),一(yi)般(ban)會(hui)使(shi)得(de)極(ji)性(xing)變(bian)大(da),在(zai)梯(ti)度(du)淋(lin)洗(xi)時(shi)比(bi)較(jiao)合(he)適(shi),正(zheng)好(hao)極(ji)性(xing)越(yue)來(lai)越(yue)大(da)了(le)。在(zai)過(guo)完(wan)柱(zhu)子(zi)後(hou),溶(rong)劑(ji)最(zui)後(hou)回(hui)收(shou)要(yao)采(cai)用(yong)常(chang)壓(ya),因(yin)為(wei)在(zai)減(jian)壓(ya)旋(xuan)蒸(zheng)時(shi)會(hui)有(you)部(bu)分(fen)低(di)沸(fei)點(dian)的(de)雜(za)質(zhi)一(yi)起(qi)出(chu)來(lai),常(chang)壓(ya)時(shi)就(jiu)會(hui)減(jian)少(shao)這(zhe)種(zhong)現(xian)象(xiang),如(ru)果(guo)雜(za)質(zhi)和(he)你(ni)下(xia)麵(mian)要(yao)過(guo)的(de)樣(yang)品(pin)有(you)反(fan)應(ying)那(na)就(jiu)慘(can)了(le)。
關於操作問題。
1 裝柱。
柱zhu子zi下xia麵mian的de活huo塞sai一yi定ding不bu要yao塗tu潤run滑hua劑ji,會hui被bei淋lin洗xi劑ji帶dai到dao產chan品pin中zhong的de,可ke以yi采cai用yong四si氟fu節jie門men的de。幹gan法fa和he濕shi法fa裝zhuang柱zhu覺jiao得de沒mei什shen麼me區qu別bie,隻zhi要yao能neng把ba柱zhu子zi裝zhuang實shi就jiu行xing。裝zhuang完wan的de柱zhu子zi應ying該gai要yao適shi度du的de緊jin密mi(太密了淋洗劑走的太慢),一定要均勻(不然樣品就會從一側斜著下來)。書shu中zhong寫xie的de都dou是shi不bu能neng見jian到dao氣qi泡pao,我wo覺jiao得de在zai大da多duo數shu情qing況kuang下xia有you些xie小xiao氣qi泡pao沒mei太tai大da的de影ying響xiang,一yi加jia壓ya氣qi泡pao就jiu全quan下xia來lai了le。當dang然ran如ru果guo你ni裝zhuang的de柱zhu子zi總zong是shi有you氣qi泡pao就jiu說shuo明ming需xu要yao多duo練lian習xi了le。但dan是shi柱zhu子zi更geng忌ji諱hui的de是shi開kai裂lie,甭beng管guan豎shu的de還hai是shi橫heng的de,都dou會hui影ying響xiang分fen離li效xiao果guo,甚shen至zhi作zuo廢fei!
2 加樣。
yongshaoliangderongjirongyangpinjiayang,jiawanhoujiangxiamiandehuosaidakai,dairongjicengxiajiangzhishiyingshamianshi,zaijiashaoliangdedijixingrongji,ranhouzaidakaihuosai,ruciliangsanci,yibanshiyingshajiujibenshibaisedele。jiarulinxiji,yikaishibuyaojiaya,dengrongyangpinderongjiheyangpincengyouyiduanjuli(2~4cm就夠了),再加壓,這樣避免了溶劑(如二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。
3 淋洗劑的選擇。
感覺上要使所需點在Rf0.2~0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開,過柱子就用那種極性,如果Rf在0.6,即使相差0.2也不容易在柱子上分開,因為柱子是一個多次爬板的狀態,可以通過公式的比較:0.6/0.8一次的分離度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。
4 樣品的收集。
yongguijiaozuogudingxiangguozhuzideyuanlishiyigexifuyujiexidepingheng。suoyiruguoyangpinyuguijiaodexifubijiaoqiangdehua,jiuburongyiliuchu。zheyangjiuhuifasheng,houmiandedianxianchu,erqianmiandedianhouchu。zheshikeyicaiyongyanghualvzuogudingxiang。
另外,收集的試管大小要以樣品量而定,特別是小量樣品,如果用大試管,可能一根就收
到了三個樣品,wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。
5 最後的處理。
柱zhu分fen後hou的de產chan品pin,由you於yu使shi用yong了le大da量liang的de溶rong劑ji,其qi中zhong的de雜za質zhi也ye會hui累lei積ji到dao產chan品pin中zhong,所suo以yi如ru果guo想xiang送song分fen析xi,最zui好hao用yong少shao量liang的de溶rong劑ji洗xi滌di一yi下xia,因yin為wei大da部bu分fen的de雜za質zhi是shi溶rong在zai溶rong劑ji裏li的de,一yi洗xi基ji本ben就jiu沒mei了le,必bi要yao時shi進jin行xing重zhong結jie晶jing
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