在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此必然帶來一些特殊的問題，我們必須充分地重視。

 

1、yaozhuyirongjidehurongxing，buxianghunrongderongjibunengyongzuotiduxituodeliudongxiang。youxierongjizaiyidingdebilineihurong，chaochuyidingdefanweihoujiubuhuihurong。liru：乙腈和1mol/L的醋酸銨（pH5.16）做梯度洗脫
，乙腈含量超過70%時就會出現不溶，甲醇和已烷混合，甲醇含量高於30%時就會分層等。當有機溶劑和緩衝溶液混合時還可能析出鹽的結晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

 

2、梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)所(suo)用(yong)的(de)溶(rong)劑(ji)純(chun)度(du)要(yao)求(qiu)更(geng)高(gao)，以(yi)保(bao)證(zheng)好(hao)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)。進(jin)行(xing)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)前(qian)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)空(kong)白(bai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)
，以(yi)辯(bian)認(ren)溶(rong)劑(ji)雜(za)質(zhi)峰(feng)
，因(yin)為(wei)弱(ruo)溶(rong)劑(ji)中(zhong)的(de)雜(za)質(zhi)富(fu)集(ji)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)頭(tou)上(shang)後(hou)會(hui)被(bei)強(qiang)的(de)溶(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)出(chu)來(lai)。用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)溶(rong)劑(ji)需(xu)徹(che)底(di)脫(tuo)氣(qi)，以(yi)防(fang)止(zhi)溶(rong)劑(ji)混(hun)合(he)時(shi)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。

 

3、hunherongjidezhanduchangsuizuchengerbianhua，yincizaitiduxituoshichanghuichuxianyalibianhua
，liruchunshuihuojiachundezhandudoubijiaoxiao，danshidangerzheyixiangjindebilihunheshizhanduhuizengdahenduo，cishidezhuyashichunshuihuojiachunweiliudongxiangshideliangbei。yinciyaozhuyifangzhitiduxituoguochengzhongyalichaoguoshuyebenghuosepuzhusuonengchengshoudezuidayali。

 

4、每次梯度洗脫之後必須對色譜柱進行再生處理，使其恢複到初始的狀態。需讓10～30倍柱容積的初始流動相流經色譜柱，使固定相與初始流動相達到完全平衡。