一、氨基酸分析方法分類

氨基酸分析按其分離和檢測方法的不同可分為三大類型。第一類是基於陽離子交換柱分離
、柱後茚三酮衍生、光度法測定的離子交換色譜法（IEC）。此類方法由Stein和Moore兩人1958年發明
，並於1972年獲諾貝爾獎，是當今國際標準和國家標準以及仲裁和涉外的方法。第二類是所有基於反相色譜分離、柱前衍生、熒光或紫外檢測的高效液相法（HPLC）。第三類是陰離子交換分離直接安培法檢測的離子色譜法IC
，嚴格說來
，陰離子交換和陽離子交換都叫“IEC”，在此將陰離子交換分離、安培檢測的方法歸類為IC，是因為這類儀器實際上就是離子色譜儀，隻不過配置側重點為氨基酸分析。本文中對三類方法多用簡稱。

說明：

1、PITC異硫氰酸苯酯
；OPA鄰苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羥基琥貝酰亞胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯。

2
、IEC法也可使用柱後OPA衍生（熒光檢測），可以降低檢測限到1pmol，但無法檢測二級氨基酸。

二
、用戶如何選擇適合自己的方法和儀器

氨基酸分析的方法和儀器多種多樣，用戶應該根據自己的實際應用情況和發展趨勢來選擇方法和儀器。選擇時可參考以下幾個方麵：

1、是否需要對分析結果負責（如對外出具報告等）

IEC儀器使用茚三酮柱後衍生法，符合國家標準和國際仲裁標準，而IC法和HPLC法雖然總體性能也比較穩定可靠
，但其測量結果與茚三酮法有較大差異
，且結果難以長期重複，這對於仲裁不利。目前
，IC法和HPLC法分析氨基酸一般僅用於不太深入的研究，而且主要是利用其靈敏度較高的特性。也有部分企業用來做內部質量控製（國家沒有製定相關標準）
，但如果要考慮對外做樣並出具結果報告
，IECyiqishiweiyixuanze。youyuguoneideanjisuanfenxichengxianjijushangshengdeshitou，erhenduodanweijingjinengliyouxian，yinciyequeyoubushaodanweigoumaizhuanyonganjisuanfenxiyizuoweichuangshoushouduan。

2
、一次進樣需要出峰的數量是多還是少

氨基酸種類繁多、性xing質zhi接jie近jin，因yin此ci氨an基ji酸suan分fen析xi是shi色se譜pu界jie公gong認ren的de難nan題ti
，盡jin管guan現xian在zai有you多duo種zhong多duo樣yang的de方fang法fa，但dan沒mei有you任ren何he方fang法fa能neng夠gou保bao證zheng所suo有you氨an基ji酸suan峰feng能neng夠gou一yi次ci進jin樣yang完wan全quan的de分fen離li。僅jin僅jin從cong分fen離li程cheng度du來lai說shuo
，好hao的deHPLC方法最多可以一次分離檢測20種左右的氨基酸峰
，IC法最多可一次分離檢測約30種氨基酸峰（理論上說來

，IC法可達到與IEC法相當的出峰數量，但金電極的基線漂移較大，保留時間太長的峰就難以定量分析），IEC法最多一次可分離檢測50種左右的氨基酸峰。從這個角度來說
，如果您需要分析遊離氨基酸樣品，就應當選擇IEC儀器。

3、氨基酸分析頻率高還是低

氨基酸樣品分析頻率如果達到每個星期至少1次
，就可以算“頻率較高”，少於每周1次就可以說是“較低”。頻率較高時，應當儀器專用化（即便是用HPLC和IC法，也應專用於氨基酸分析）
，因為反複更換柱子和緩衝體係不僅麻煩

、平衡時間長

，難以保證分析結果的可靠性和重複性，而且容易損壞儀器。

4、氨基酸樣品總量是多還是少

總體的成本應考慮到做樣成本，而不能隻看儀器本身。HPLC做氨基酸分析時，每根柱子隻能進樣100～500針，而IEC儀器的柱子都超過1000針（sykam柱子使用國產試劑時大於4000針，使用進口試劑時大於6000針）。

如果都使用國產試劑，HPLC儀器單針成本平均160元人民幣
，IEC儀器單針成本平均不到20元人民幣，IC儀器單針成本平均60元人民幣（IC法無需衍生劑，但檢測電極是消耗品）。此處計算了標樣、緩衝溶液、衍生劑、柱子等消耗品價格，而儀器的維護保養費用相同（未計算）。下表是專用氨基酸分析儀IEC
、HPLC和IC（都配置自動進樣，HPLC加配氨基酸分析包）的總成本分析。

也就是說，當分析樣品量超過1000個（進樣針數大於2500），IEC專用氨基酸分析儀就開始成為費用最低的儀器了。通常儀器的使用壽命超過8年（平均10年左右）
，隻要每年的樣品量大於100個，IEC儀器就沒有價格上的劣勢。

三
、哪些儀器是“氨基酸分析儀”

我們已經比較了HPLC、IC和IEC這三大類氨基酸分析方法，總的說來
，它們適合不同情況下的應用
，雖然IEC茚(yin)三(san)酮(tong)柱(zhu)後(hou)衍(yan)生(sheng)法(fa)適(shi)應(ying)範(fan)圍(wei)更(geng)廣(guang)泛(fan)，但(dan)儀(yi)器(qi)售(shou)價(jia)也(ye)明(ming)顯(xian)要(yao)高(gao)。目(mu)前(qian)中(zhong)國(guo)市(shi)場(chang)上(shang)號(hao)稱(cheng)是(shi)專(zhuan)用(yong)氨(an)基(ji)酸(suan)分(fen)析(xi)儀(yi)的(de)有(you)很(hen)多(duo)，對(dui)於(yu)用(yong)戶(hu)而(er)言(yan)，也(ye)未(wei)必(bi)需(xu)要(yao)去(qu)分(fen)辯(bian)誰(shui)是(shi)真(zhen)正(zheng)的(de)專(zhuan)用(yong)氨(an)基(ji)酸(suan)分(fen)析(xi)儀(yi)，而(er)且(qie)國(guo)家(jia)儀(yi)器(qi)名(ming)錄(lu)甚(shen)至(zhi)國(guo)際(ji)上(shang)都(dou)沒(mei)有(you)明(ming)確(que)提(ti)出(chu)專(zhuan)用(yong)氨(an)基(ji)酸(suan)分(fen)析(xi)儀(yi)的(de)定(ding)義(yi)，但(dan)在(zai)中(zhong)國(guo)市(shi)場(chang)，無(wu)論(lun)是(shi)使(shi)用(yong)者(zhe)還(hai)是(shi)儀(yi)器(qi)廠(chang)家(jia)
，一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)把(ba)陽(yang)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)分(fen)離(li)、茚三酮柱後衍生法儀器叫作“氨基酸分析儀”。這類儀器技術門檻較高，國內目前還沒有廠家生產此類儀器，代表廠商有德國sykam

、日本hitachi等。而IC法儀器的代表是Dionex公司的AAA-direct。

四、IEC儀器之間的比較

IEC儀器也有幾個廠家生產，用戶該如何選擇？

第一，當然是滿足分析需要的技術指標如分離度、重複性等要求，而其中的分離度又是更為重要的指標，因為，色譜理論一般以分離度達到1.2作為兩峰基本分離的判定前提，隻有峰分開了

，才有意義去討論定性和定量的重複性。

第二
，應考慮儀器的可靠性。如果儀器今天堵了、明天漏了
，用戶不僅要付出大量人力財力，分析結果的可信度也將大打折扣。

第三
，應考慮儀器的運行成本。例如是否可以使用國產試劑、柱子壽命（以多少次進樣計算
、而不以多少年計算）等。

第四，應考慮儀器設計是否有利於氨基酸分析
，例如是否有惰性氣體保護（茚三酮極易被氧化）、是否提供在線脫氣、是否提供溶液和樣品的製冷控製等。

第五，應考慮售後服務。分析過程中遇到困難是在所難免
，廠家必須能夠快速響應
、jinkuaijiejuewenti。lingwai，changyongbeijiandejiageyeshiyigezhongyaoyinsu，yinweiyonghuzaigoumaiqianyibannanyizhuyidaoshouhoudewenti，erhenduochangjiayemeiyougongshizijidechangyongbeijianjiage，zhejiuweijianglaideshiyongmaixialeyinhuan
，shishishang，yedequeyouhenduoyiqi（尤其是進口儀器）在出現一些看似微小的故障之後，就因為維修費用太高而被“束之高閣”。