在使用過程中常常會出現測量誤差,這些誤差又是如何產生的呢?
1.1複色光對比耳定律的偏離
比(bi)耳(er)定(ding)律(lv)成(cheng)立(li)的(de)前(qian)提(ti)條(tiao)件(jian)是(shi)入(ru)射(she)光(guang)是(shi)單(dan)色(se)光(guang),但(dan)是(shi)精(jing)度(du)再(zai)高(gao)的(de)儀(yi)器(qi),即(ji)使(shi)是(shi)雙(shuang)單(dan)色(se)器(qi)的(de)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji),也(ye)隻(zhi)能(neng)獲(huo)得(de)近(jin)乎(hu)單(dan)色(se)的(de)光(guang),無(wu)法(fa)獲(huo)得(de)純(chun)單(dan)色(se)光(guang),它(ta)仍(reng)然(ran)含(han)有(you)狹(xia)窄(zhai)光(guang)通(tong)帶(dai),具(ju)有(you)複(fu)色(se)光(guang)的(de)性(xing)質(zhi)。而(er)複(fu)色(se)光(guang)會(hui)導(dao)致(zhi)比(bi)耳(er)定(ding)律(lv)的(de)正(zheng)或(huo)負(fu)偏(pian)離(li)。
固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm,可調狹縫的可以做到0.Inm;可見分光光度計帶寬6nm、snm,甚至十幾納米。
光guang譜pu帶dai寬kuan應ying該gai是shi越yue小xiao越yue好hao,但dan是shi隨sui著zhe光guang譜pu分fen辨bian率lv的de提ti高gao,儀yi器qi的de靈ling敏min度du降jiang低di,所suo以yi選xuan擇ze儀yi器qi時shi要yao綜zong合he考kao慮lv各ge種zhong條tiao件jian的de影ying響xiang。當dang溶rong液ye濃nong度du較jiao小xiao且qie單dan色se光guang較jiao純chun時shi,可ke近jin似si認ren為wei符fu合he比bi耳er定ding律lv。
1.2雜散光的影響
雜散光是指進入檢測器的處於待測波長光譜帶寬範圍外的其他波長組分,它是光譜測量中誤差的主要來源。
產生原因有:分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處,由於單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低,雜散光的影響更為顯著。
zasanguangxianzhiyiqidefenxishangxiankeyinqiyanzhongdeceliangwucha,shijigongzuozhong,zaidingliangfenxishi,yibanzaixishoufenghuoqifujinchuceliangyangpinxiguangdu,ruguozaifenxibochangchuhanyouzasanguang,zheshiyangpindetouguanglvjiaoxiao,erzasanguangdabufentouguo,shiceliangxiguangdudiyuzhenshixiguangdu。
1.3儀器噪聲對測t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個重要指標,它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號,掃描100%T和0%T線,可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會掩蓋較小的測量信號,一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。
1.4波長和吸光度準確度
樣yang品pin的de每mei一yi個ge值zhi都dou是shi在zai一yi定ding的de波bo長chang下xia測ce得de的de,如ru果guo波bo長chang誤wu差cha很hen大da,測ce出chu的de值zhi肯ken定ding不bu準zhun。吸xi光guang度du準zhun確que度du也ye是shi用yong戶hu對dui儀yi器qi的de直zhi接jie要yao求qiu,更geng應ying引yin起qi足zu夠gou的de重zhong視shi。
國家計量檢定規程規定雙光束紫外可見分光光度計透射比準確度為A級士0.6%, B級土1.0%。
2測量條件的選擇
2.1參比溶液和溶荊的選擇
分fen光guang光guang度du計ji的de測ce量liang實shi際ji上shang是shi以yi通tong過guo參can比bi池chi的de光guang強qiang度du作zuo為wei入ru射she光guang強qiang度du來lai測ce定ding試shi樣yang的de吸xi光guang度du,先xian調tiao節jie儀yi器qi使shi透tou過guo參can比bi池chi溶rong液ye的de吸xi光guang度du為wei零ling,然ran後hou讓rang同tong一yi束shu光guang通tong過guo樣yang品pin,使shi得de吸xi光guang度du比bi較jiao真zhen實shi地di反fan映ying待dai測ce物wu質zhi的de濃nong度du,所suo以yi參can比bi溶rong液ye的de選xuan擇ze非fei常chang重zhong要yao。
如(ru)果(guo)僅(jin)有(you)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)與(yu)顯(xian)色(se)劑(ji)的(de)反(fan)應(ying)產(chan)物(wu)有(you)吸(xi)收(shou),可(ke)用(yong)純(chun)溶(rong)劑(ji)或(huo)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)作(zuo)參(can)比(bi)溶(rong)液(ye)。如(ru)果(guo)顯(xian)色(se)劑(ji)有(you)顏(yan)色(se),並(bing)在(zai)測(ce)定(ding)波(bo)長(chang)下(xia)有(you)吸(xi)收(shou),則(ze)用(yong)顯(xian)色(se)劑(ji)溶(rong)液(ye)作(zuo)參(can)比(bi)溶(rong)液(ye),所(suo)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)及(ji)其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)的(de)量(liang),與(yu)試(shi)樣(yang)中(zhong)的(de)加(jia)入(ru)量(liang)應(ying)一(yi)致(zhi)。
如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有幹擾,而所用顯色劑沒顏色,則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。
正確選擇合適的溶劑,對提高分析的準確度起重要作用。為減小溶劑中雜質的影響,應選擇高純度的溶劑;溶劑應不與待測物質發生化學反應;待測物在溶劑中要有一定的溶解度;在測定的波長範圍內,溶劑本身沒有吸收,注意常用溶劑的最短可用波長;當用揮發性大的溶劑時,測量過程中吸收池應加蓋。
2.2測試波長的選擇
dangyongfenguangguangdujiduirongyejinxingcedingshi,shouxianxuyaoxuanzeheshideceliangbochang。xuanzedeyijushigaibeicerongyedexishouquxian。zaiyibanqingkuangxia,womenzongshixuanzezuidaxishoubochangzuoweiceliangbochang,zheyangkeyitigaolingmindu。
而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有幹擾存在,就不能選最大吸收波長,而必須在保證有一定靈敏度的情況下,選擇吸收曲線中的其它波長進行測定(曲線較平坦處對應的波長),以消除幹擾。繪製吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。
3、分光光度計的檢驗小妙招
波長準確度的檢驗
分光光度計在使用過程中,由於機械振動、溫度變化、燈絲變形、燈deng座zuo鬆song動dong或huo更geng換huan燈deng泡pao等deng原yuan因yin,經jing常chang會hui出chu現xian刻ke度du盤pan上shang的de讀du數shu與yu實shi際ji通tong過guo溶rong液ye的de波bo長chang不bu符fu合he的de現xian象xiang,因yin而er導dao致zhi儀yi器qi靈ling明ming度du降jiang低di,影ying響xiang測ce定ding結jie果guo的de精jing度du,需xu要yao進jin行xing檢jian驗yan。
檢驗波長準確度最簡單的方法是用幹涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標準值之差超出規程規定, 則需要進行波長調節。
透射比正確度的檢驗
用透射比標準值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,可見光區分別在440、546、635nm波長處,以空氣為參比,分別測量各濾光片的透射比,紫外光區用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長處,以高氯酸溶液為參比,測量其透射比。
穩定度的檢驗
在零點不受光的條件下,用零點調節器將儀器調至零點,觀察3分鍾讀取透射比的變化,即為零點穩定性。在儀器測量範圍兩端向中間靠10nm處,調節零點後,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調節透射比為95%(數顯儀器調至100%)察3分鍾讀取透射比的變化,為光電流穩定性。
光的檢驗
可見分光計棱鏡式儀器在420nm處,光柵式儀器在360nm處,紫外分光計在220nm處分別用符合規定的截止濾光片,以空氣為參比,測量其透射比值,即為儀器在相應波長下的雜散輻射率。
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