GB 4789.15-2016 黴菌和酵母計數 已經實施一段時間了,很多小夥伴們在論壇中反應新版國標彙總黴菌正置培養容易汙染,今天小編就來為大家分析一下這個問題。
GB 4789.15-2016相比GB 4789.15-2010,最大的區別可能就在於對平皿的培養方式。2016版的國標在5.2中要求:瓊脂凝固後,正置平板,置28℃±1℃培養箱中培養,觀察並記錄培養至第5d的結果。其實針對這一條,需要注意兩點:第一,是需要對平板進行觀察的,不能直接培養至第5天計數,因為黴菌的特殊性,在培養過程中會產生大量孢子,導致整個平板蔓延。因此,在培養後的第2天開始,就要對平板進行觀察,並計數典型菌落,而這樣的觀察在之後每一天都應該進行,直至培養第5天。第二,就是正置培養。這一點是16版國標與舊版最大的區別,10版之前的國標都是倒置培養的。而進行正置培養,很多朋友可能都會遇到平板被黴菌汙染的問題,比如圖中的情況,這怎麼解決呢?

其實造成這種情況的原因有很多種,可能有培養箱環境汙染,平皿冷凝水汙染,操作環境汙染、培養基問題等等,這些問題都該如何解決呢?
正(zheng)置(zhi)培(pei)養(yang)和(he)倒(dao)置(zhi)培(pei)養(yang)有(you)什(shen)麼(me)區(qu)別(bie)?很(hen)多(duo)實(shi)驗(yan)室(shi)培(pei)養(yang)黴(mei)菌(jun)采(cai)用(yong)的(de)是(shi)專(zhuan)用(yong)的(de)黴(mei)菌(jun)培(pei)養(yang)箱(xiang),所(suo)以(yi)培(pei)養(yang)箱(xiang)空(kong)間(jian)裏(li)會(hui)有(you)大(da)量(liang)的(de)黴(mei)菌(jun)孢(bao)子(zi)。而(er)平(ping)皿(min)的(de)蓋(gai)和(he)底(di)是(shi)有(you)一(yi)定(ding)縫(feng)隙(xi)的(de),尤(you)其(qi)是(shi)玻(bo)璃(li)平(ping)皿(min)縫(feng)隙(xi)還(hai)是(shi)比(bi)較(jiao)大(da)的(de),正(zheng)置(zhi)培(pei)養(yang)中(zhong),孢(bao)子(zi)會(hui)向(xiang)上(shang)飛(fei)揚(yang)通(tong)過(guo)縫(feng)隙(xi)落(luo)到(dao)平(ping)板(ban)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang),導(dao)致(zhi)汙(wu)染(ran)。細(xi)心(xin)地(di)實(shi)驗(yan)猿(yuan)可(ke)能(neng)發(fa)現(xian),汙(wu)染(ran)的(de)菌(jun)落(luo)大(da)部(bu)分(fen)都(dou)是(shi)在(zai)平(ping)皿(min)邊(bian)緣(yuan)生(sheng)長(chang)的(de)。用(yong)一(yi)次(ci)性(xing)塑(su)料(liao)平(ping)皿(min)來(lai)培(pei)養(yang),汙(wu)染(ran)的(de)概(gai)率(lv)就(jiu)會(hui)小(xiao)很(hen)多(duo),因(yin)為(wei)一(yi)次(ci)性(xing)塑(su)料(liao)平(ping)皿(min)的(de)蓋(gai)和(he)底(di)之(zhi)間(jian)的(de)縫(feng)隙(xi)相(xiang)比(bi)之(zhi)下(xia)是(shi)比(bi)較(jiao)小(xiao)的(de)。因(yin)此(ci)培(pei)養(yang)箱(xiang)環(huan)境(jing)中(zhong)的(de)孢(bao)子(zi)可(ke)能(neng)會(hui)是(shi)主(zhu)要(yao)汙(wu)染(ran)源(yuan)。這(zhe)樣(yang)一(yi)來(lai),就(jiu)應(ying)該(gai)對(dui)培(pei)養(yang)箱(xiang)進(jin)行(xing)殺(sha)菌(jun)。可(ke)以(yi)考(kao)慮(lv)用(yong)紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)一(yi)下(xia),同(tong)時(shi)輔(fu)助(zhu)消(xiao)毒(du)劑(ji)擦(ca)拭(shi)的(de)方(fang)法(fa),常(chang)用(yong)消(xiao)毒(du)劑(ji)比(bi)如(ru)75%酒jiu精jing和he新xin潔jie爾er滅mie等deng,應ying該gai注zhu意yi的de是shi,這zhe樣yang的de殺sha菌jun操cao作zuo也ye是shi需xu要yao經jing常chang進jin行xing的de,因yin為wei黴mei菌jun的de孢bao子zi是shi十shi分fen難nan清qing楚chu的de,而er每mei次ci培pei養yang可ke能neng又you會hui引yin進jin新xin的de汙wu染ran源yuan,可ke以yi考kao慮lv每mei周zhou進jin行xing兩liang次ci,保bao證zheng培pei養yang環huan境jing無wu汙wu染ran源yuan。
還(hai)有(you)別(bie)的(de)方(fang)麵(mian)需(xu)要(yao)注(zhu)意(yi),首(shou)先(xian)就(jiu)是(shi)平(ping)皿(min)上(shang)的(de)泠(ling)凝(ning)水(shui)問(wen)題(ti)。正(zheng)置(zhi)培(pei)養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong),若(ruo)是(shi)平(ping)皿(min)的(de)上(shang)蓋(gai)有(you)泠(ling)凝(ning)水(shui),在(zai)培(pei)養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)冷(leng)凝(ning)水(shui)滴(di)落(luo)到(dao)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang),也(ye)極(ji)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)菌(jun)落(luo)蔓(man)延(yan),平(ping)皿(min)汙(wu)染(ran)。因(yin)此(ci)在(zai)培(pei)養(yang)之(zhi)前(qian),一(yi)定(ding)要(yao)保(bao)證(zheng)平(ping)皿(min)幹(gan)燥(zao),可(ke)以(yi)把(ba)平(ping)皿(min)放(fang)在(zai)37℃的環境裏烘幹,烘幹之後再進行培養,就會避免這個原因造成的汙染。
最(zui)後(hou)還(hai)有(you)就(jiu)是(shi)操(cao)作(zuo)環(huan)境(jing)和(he)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)汙(wu)染(ran)。因(yin)為(wei)無(wu)菌(jun)室(shi)裏(li)可(ke)能(neng)也(ye)會(hui)因(yin)為(wei)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)不(bu)理(li)想(xiang)造(zao)成(cheng)汙(wu)染(ran)。小(xiao)編(bian)之(zhi)前(qian)工(gong)作(zuo)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi),操(cao)作(zuo)台(tai)使(shi)用(yong)紫(zi)外(wai)線(xian)滅(mie)菌(jun),經(jing)常(chang)就(jiu)會(hui)滅(mie)菌(jun)不(bu)徹(che)底(di)有(you)孢(bao)子(zi)汙(wu)染(ran),尤(you)其(qi)是(shi)在(zai)進(jin)行(xing)過(guo)黴(mei)菌(jun)的(de)相(xiang)關(guan)檢(jian)測(ce)之(zhi)後(hou)。所(suo)以(yi)在(zai)進(jin)行(xing)過(guo)黴(mei)菌(jun)檢(jian)測(ce)之(zhi)後(hou),適(shi)當(dang)的(de)增(zeng)長(chang)滅(mie)菌(jun)時(shi)間(jian),可(ke)能(neng)會(hui)達(da)到(dao)比(bi)較(jiao)理(li)想(xiang)的(de)效(xiao)果(guo)。另(ling)外(wai)小(xiao)編(bian)之(zhi)前(qian)工(gong)作(zuo)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi),為(wei)了(le)徹(che)底(di)解(jie)決(jue)無(wu)菌(jun)室(shi)空(kong)間(jian)孢(bao)子(zi)汙(wu)染(ran)的(de)問(wen)題(ti),還(hai)特(te)地(di)購(gou)買(mai)安(an)裝(zhuang)了(le)臭(chou)氧(yang)發(fa)生(sheng)器(qi),通(tong)過(guo)紫(zi)外(wai)線(xian)+臭氧的雙重消毒模式,效果就十分理想了。
大家如果還是想驗證一下究竟是什麼原因造成的汙染,這裏提供一個簡單的驗證試驗:在正常檢測的環境中倒一組空白平皿,將這些平皿分為AB兩組,其中A組用封口膜將平皿封好,B組不封,均放置在培養箱中正置培養。若是A組B組均有黴菌生長,則需要考慮培養基汙染或者操作環境的汙染;若是A組不生長黴菌而B組生長,則需要考慮是培養箱內的環境汙染。通過這個小試驗,可以基本上確定汙染源,然後針對汙染源進行相應的處理。
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