引言：
 

  阪崎腸杆菌（又稱阪崎氏腸杆菌）是一種周身無鞭毛，能運動
，無芽孢的兼性厭氧菌，革蘭氏陰性杆菌。1980年由黃色陰溝腸杆菌更名為阪崎腸杆菌。阪崎腸杆菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎
、小腸結腸炎和菌血症
，致死率可達40％～80%，自1961年首次由阪崎腸杆菌引起的新生兒腦膜炎之後
，全球範圍陸續出現感染事件


，丹麥、希臘、英國
、荷蘭、冰(bing)島(dao)等(deng)國(guo)均(jun)有(you)報(bao)道(dao)。其(qi)嚴(yan)重(zhong)性(xing)已(yi)引(yin)起(qi)世(shi)界(jie)多(duo)國(guo)相(xiang)關(guan)部(bu)門(men)的(de)重(zhong)視(shi)
，阪(ban)崎(qi)腸(chang)杆(gan)菌(jun)已(yi)被(bei)世(shi)界(jie)衛(wei)生(sheng)組(zu)織(zhi)和(he)許(xu)多(duo)國(guo)家(jia)確(que)定(ding)為(wei)引(yin)起(qi)嬰(ying)兒(er)死(si)亡(wang)的(de)重(zhong)要(yao)條(tiao)件(jian)致(zhi)病(bing)菌(jun)。我(wo)國(guo)也(ye)於(yu)2005年5月20日通過了《奶粉中阪崎腸杆菌檢測方法》行業標準，並於同年10月實施，我國《嬰兒配方食品》和《幼兒配方食品》相關標準規定嬰幼兒配方奶粉、食品中禁止檢出阪崎腸杆菌等致病菌。
 

一
、阪崎杆菌的生物學特性
 

1 形態染色
  阪崎腸杆菌屬腸杆菌科腸杆菌屬 , 因此本菌具備腸杆菌基本形態特征 : 革蘭陰性粗短杆菌，有周身菌毛 , 無芽胞, 有動力[1] 。

2 培養特性

  能在普通營養瓊脂
、血平板
、麥康凱(MAC) 瓊脂、伊紅美蘭 (EMB) 瓊脂、脫氧膽酸瓊脂等多種培養基上生長繁殖。培養最佳溫度 25 ～ 36 ℃ , 在 6～ 45 ℃下都能生長 , 某些菌株可在 47 ℃下生長

[8] 。在胰蛋白腖瓊脂 (TSA)
、腦心浸液瓊脂(BH I) 及血平板上經 25 ～ 36 ℃培養 24 h 後 , 形成 1. 5 ～ 2. 5mm, 黃色菌落。在結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂 (VRBG) 能產生紫紅色菌落[2]。
 

二、阪崎杆菌的傳統檢測方法
 

阪崎腸杆菌檢驗程序見圖 1。 

  

1 基本步驟如下：

  取檢樣100g（mL）加入已預熱至44℃裝有900mL緩衝蛋白腖水的錐形瓶中，用手緩緩地搖動至充分溶解，36℃±1℃培養18 h±2h。移取1mL轉種於10mL mLST-Vm肉湯

，44℃±0.5 ℃培養24 h±2h。 

  輕輕混勻mLST-Vm 肉湯培養物
，各取增菌培養物1環

，分別劃線接種於兩個阪崎腸杆菌顯色培養基平板
，36℃±1℃培養18 h±2 h。 

  挑取1 個～5 個可疑菌落，劃線接種於TSA平板。25℃±1℃培養48 h±4 h。 自TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落
，進行生化鑒定。阪崎腸杆菌的主要生化特征見表 1。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定係統。 

2 結果與報告 

  綜合菌落形態和生化特征，報告每100g（mL）樣品中檢出或未檢出阪崎腸杆菌。 

3 注意事項

（1）取樣前應對樣品包裝的開啟處和取樣勺進行消毒

（2）檢測樣品不能低於333g
 

三、檢測新技術簡介
 

1 熒光法選擇性培養基法

  該方法也是利用α-葡萄糖苷酶活性的檢測方法[3]。在營養瓊脂基礎上添加4 -甲基-傘形酮-α- D -葡萄糖苷 (α-MUG) 。阪崎腸杆菌在該培養基上形成黃色菌落 , 在紫外光照射下發生熒光。該法靈敏度和特異性都比較好 , 已在多個國家開展使用 , 均取得穩定可靠的結果。

2 對硝基酚光電比色法

  利用阪崎腸杆菌的α-葡萄糖苷酶活性 , 分解對硝基酚-α- D -葡萄糖苷底物 , 釋放黃色的對硝基酚 , 在 405 nm 波長下測定吸光度 , 根據吸光度的大小 , 確定樣品中阪崎腸杆菌是否存在。方法是常規增菌 , 在 VRBG 或 TSA 平板上挑取可疑菌落 , 製備成一定濃度的菌懸液與底物混勻 , 37 ℃ 4 h 後進行比色測定[4]。

3 熒光定量 PCR 方法 　

  熒光定量 PCR 技術的基本原理是在PCR 反應體係中加入熒光基團 , 該基團是一對合適的熒光物質 , 可以構成一個能量供體和能量受體對 , 其中供體的發射光譜和受體的吸收光譜重疊 , 在 PCR 反應基因擴增時 , 激發供體而釋放的熒光能量正好被受體吸收 , 使得供體的熒光強度減弱而受體熒光強度增強 , 利用熒光信號強弱變化積累實時監測整個 PCR 反應過程 , 最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。

  實時熒光定量 PCR 技術已廣泛應用於多種食品微生物汙染的檢測。 SEO 等利用阪崎腸杆菌部分大分子合成(MMS) 操縱子基因序列建立了奶粉中阪崎腸杆菌的實時熒光定量 PCR 方法 , 能檢測到 

  0.6-1g 奶粉中的阪崎腸杆菌 , 且比傳統培養法檢測時間從 6 ～ 7 天縮短至 2 天內完成。對 68株阪崎腸杆菌和 55 株非阪崎菌進行檢測 , 未出現假陽性和假陰性 , 具有很好的特異性。
 

結語：
 

  傳統的檢測方法存在操作繁瑣，時間長等缺點,很(hen)難(nan)滿(man)足(zu)現(xian)代(dai)臨(lin)床(chuang)快(kuai)速(su)診(zhen)斷(duan)和(he)治(zhi)療(liao)的(de)需(xu)求(qiu)。要(yao)了(le)解(jie)更(geng)準(zhun)確(que)，快(kuai)速(su)
，簡(jian)便(bian)
，可(ke)靠(kao)的(de)方(fang)法(fa)和(he)技(ji)術(shu)，科(ke)學(xue)為(wei)此(ci)已(yi)作(zuo)了(le)大(da)量(liang)的(de)研(yan)究(jiu)，試(shi)驗(yan)方(fang)法(fa)和(he)識(shi)別(bie)技(ji)術(shu)正(zheng)在(zai)不(bu)斷(duan)發(fa)展(zhan)和(he)完(wan)善(shan)
，並(bing)在(zai)實(shi)踐(jian)中(zhong)不(bu)斷(duan)取(qu)得(de)新(xin)的(de)進(jin)展(zhan)。