培養基是液體、半ban固gu體ti或huo固gu體ti形xing式shi的de,含han天tian然ran或huo合he成cheng成cheng分fen,用yong於yu保bao證zheng微wei生sheng物wu繁fan殖zhi或huo保bao持chi其qi活huo力li的de物wu質zhi。培pei養yang基ji的de製zhi備bei和he使shi用yong是shi微wei生sheng物wu實shi驗yan室shi檢jian測ce工gong作zuo的de重zhong要yao環huan節jie,培pei養yang基ji自zi身shen質zhi量liang的de優you劣lie、保存是否得當、配製使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。
四、培養基的性能測試
1.外觀控製
製備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉澱。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。
2.汙染控製
從每批製備好的培養基中選取部分進行汙染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。
3.性能測試
(1)測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩定特性並能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株,應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。
(2) 定量測試方法(改良Miles-Misra法) 測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區域並標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液於試驗平板和對照平板標記好的區域;將稀釋液塗滿整個1/4區域,37℃培養18小時;對易計數的區域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低於0.7,該類培養基應易於目標菌生長;選擇性培養基上目標菌的生長率應不低於0.1。
(3)半定量測試方法(改進的劃線法接種法) 平板分ABCD四區,共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少於劃線的一半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長,而非目標菌的生長應部分或全被抑製,目標菌的生長指數G大於6時,培養基可接受。
(4)定性測試方法(平板接種觀察法) 用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)取(qu)測(ce)試(shi)菌(jun)培(pei)養(yang)物(wu),在(zai)測(ce)試(shi)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)劃(hua)平(ping)行(xing)直(zhi)線(xian)。按(an)標(biao)準(zhun)中(zhong)規(gui)定(ding)的(de)培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度(du)對(dui)接(jie)種(zhong)後(hou)的(de)平(ping)板(ban)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang),目(mu)標(biao)菌(jun)應(ying)呈(cheng)現(xian)良(liang)好(hao)生(sheng)長(chang),並(bing)有(you)典(dian)型(xing)的(de)菌(jun)落(luo)外(wai)觀(guan)、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長。
總之,培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題,都將導致檢驗結果科學性、客(ke)觀(guan)性(xing)的(de)偏(pian)離(li)。因(yin)此(ci),加(jia)強(qiang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)製(zhi),認(ren)真(zhen)地(di)做(zuo)好(hao)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)質(zhi)控(kong)工(gong)作(zuo),不(bu)斷(duan)完(wan)善(shan)和(he)提(ti)高(gao)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)質(zhi)控(kong)水(shui)平(ping),才(cai)能(neng)為(wei)微(wei)生(sheng)物(wu)檢(jian)測(ce)實(shi)驗(yan)室(shi)提(ti)供(gong)高(gao)質(zhi)量(liang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。
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