實驗目的

掌握動物骨髓染色體標本製備基本過程
，了解操作步驟的原理

 

實驗原理

小(xiao)鼠(shu)骨(gu)髓(sui)細(xi)胞(bao)中(zhong)的(de)造(zao)血(xue)幹(gan)細(xi)胞(bao)是(shi)生(sheng)成(cheng)各(ge)種(zhong)血(xue)細(xi)胞(bao)和(he)原(yuan)始(shi)細(xi)胞(bao)，具(ju)有(you)高(gao)度(du)的(de)分(fen)裂(lie)能(neng)力(li)，本(ben)實(shi)驗(yan)采(cai)用(yong)這(zhe)一(yi)材(cai)料(liao)
，通(tong)過(guo)前(qian)處(chu)理(li)
，低(di)滲(shen)

，固(gu)定(ding)，製(zhi)片(pian)，染(ran)色(se)等(deng)步(bu)驟(zhou)製(zhi)得(de)染(ran)色(se)體(ti)標(biao)本(ben)


，可(ke)觀(guan)察(cha)到(dao)許(xu)多(duo)處(chu)於(yu)分(fen)裂(lie)中(zhong)期(qi)的(de)染(ran)色(se)體(ti)，可(ke)以(yi)進(jin)行(xing)染(ran)色(se)體(ti)組(zu)型(xing)分(fen)析(xi)。

實驗原理

製備方法包括以下幾個要點: 

1. 用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細胞分裂停滯在中期, 使中期染色體停留在赤道麵處

2. 用低滲法使將細胞膨脹, 以至於在滴片時細胞被脹破, 使細胞的染色體鋪展到載玻片上

3. 空氣幹燥法可使使細胞的染色體在載片上展平, 經Giemsa染色後便可觀察到染色體的顯微圖象 

 

 實驗用品

1．材料：小白鼠 

2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 鑷子 玻璃吸管 10ml刻度的離心管 離心機 載玻片 蓋玻片 顯微鏡 濾紙 擦鏡紙 紗布 恒溫水浴鍋 

3．藥品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%檸檬酸鈉 改良石炭酸品紅

實驗步驟

預處理→取股骨→衝洗骨髓→離心→低滲→離心→固定→離心→滴片→染色→觀察 

 

1．預處理：實驗前2.5-3小時，按每克體重注射0.02ml，給小白鼠腹腔注射秋水仙素。 

2．取股骨：斷頸處死小鼠後，剔去肌肉組織
，洗淨

3．衝洗骨髓：剪去兩端的股骨頭，吸取 10ml 2%檸檬酸鈉

，注射 器針頭插入股骨一端,反複衝洗兩根股骨，洗液收集到10ml的離心管中

4 ．離心： 1000r/min 離心10 min ,棄上清

5 ．低滲：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低滲30 min ，中間（約15 min ）再吹散一次
，使細胞分散，懸浮於溶液中 

6．離心：1000r/min離心10 min

，棄上清

7．固定：沉澱加8ml固定液，並用吸管輕 輕吹勻，進行固定，中間（約15 min ）再吹散一次

 實驗步驟

8. 離心： 1000r/min 離心10 min ,留1 ml 左右上清，輕輕吹打成細胞懸液

9. 滴片：用吸管吸取細胞懸液
，高度30-40 cm，滴在預冷的載玻片上，在酒精燈火焰上微微加熱，室溫晾幹 

10. 染色：改良石炭酸品紅染色10-20 min

11. 觀察：低倍———高倍