從上述要求中可以直觀的看出，不同色譜技術對於分離度的要求不盡相同
，至於個中緣由我們暫不揣度。隻是有一點很重要：分離度不是指導原則等文件規定死的一個參數
，正如大多技術參數一樣，始終是為了滿足使用目的而進行的“私人訂製”，量後裁！

但是


，理論指導實踐
，實踐是檢驗真理的唯一標準。比如說，上麵對於基線分離的描述情形
，在實際工作中基本不可能
，而且說“基本”是為了滿足“一切皆有可能”的嚴謹，否則可以直接說“根本不可能”。因為德國哲學家萊布尼茨說
，世界上沒有完全相同的兩片樹葉，而每一個色譜工作者都可以說，世上沒有完全相同的兩個色譜峰。

既然如此，那我們就不要再執念於分離度1.5了，也不要自欺欺人的出具一個顯示分離度大於1.5的色譜報告而不看實際分離效果了。

仿製藥或者改良型新藥
，甚至創新藥！99.9%的核心技術思想離不開模仿
、借鑒，還有0.1%留給那些從0到1的“傳說”。同樣的，我們這個問題，不妨看看別人家的孩子是如何優秀解決的。

下表1列舉了從中國藥典以及歐洲藥典中隨機摘錄了一些典型的實例，對於分離要求可以說是“五花八門”。dangran
，zheliduiyujutipinzhongweihezhidingledangqiandefenliyaoqiu，yijizuolenaxieyanjiu，womenzanbuzuoshenjiu
，yequeshiyouxinwuli，wucongxiashou，jinjincongbiaoxianglaikangerenao。

如果說中國藥典中的例子還算中規中矩的拓寬了我們對分離度1.5的認識，那歐洲藥典分離度3.3、1.7
、1.1是(shi)什(shen)麼(me)操(cao)作(zuo)？這(zhe)種(zhong)有(you)零(ling)兒(er)有(you)整(zheng)兒(er)的(de)分(fen)離(li)度(du)是(shi)怎(zen)麼(me)搞(gao)出(chu)來(lai)的(de)兒(er)？峰(feng)穀(gu)比(bi)又(you)是(shi)什(shen)麼(me)操(cao)作(zuo)，跟(gen)分(fen)離(li)度(du)有(you)什(shen)麼(me)區(qu)別(bie)，我(wo)該(gai)怎(zen)麼(me)選(xuan)？看(kan)完(wan)以(yi)後(hou)什(shen)麼(me)感(gan)覺(jiao)

？眼(yan)花(hua)繚(liao)亂(luan)，再(zai)加(jia)上(shang)點(dian)眩(xuan)暈(yun)，有(you)點(dian)上(shang)頭(tou)！

帶(dai)著(zhe)一(yi)腦(nao)門(men)兒(er)的(de)問(wen)號(hao)

，總(zong)感(gan)覺(jiao)，法(fa)典(dian)裏(li)透(tou)著(zhe)點(dian)草(cao)率(lv)，嚴(yan)謹(jin)中(zhong)不(bu)失(shi)那(na)麼(me)點(dian)隨(sui)意(yi)。要(yao)不(bu)是(shi)看(kan)在(zai)歐(ou)洲(zhou)藥(yao)典(dian)的(de)麵(mian)子(zi)上(shang)
，領(ling)導(dao)不(bu)得(de)罵(ma)的(de)你(ni)找(zhao)不(bu)著(zhe)北(bei)？

能！大寫的。

而且
，在這個彰顯個性，鼓勵創新的時代裏，建議不要做分離度1.1、3.3這種純仿製，也不要假模假式的做一些分離度1.2、3.4這種me-too，可以嚐試做一些分離度2.2、4.4這種me-better，或者大膽一點做一些分離度1.03、2.21這種四不像。

實際工作中也接觸到不少人有這個想法：當分離度連中國藥典那除另有規定外的1.5都達不到時，開始動了定分離度1.0、1.2的心思。但往往隻是大筆一揮而已！比如
，方法開發及方法驗證時實際分離度為1.4，為了日後方法係統適用性通過性的保險起見
，懷著一絲的忐忑
，帶著歐洲藥典的一絲安慰，標準製定時寫下了1.2，大膽一點的直接來個1.0。

當然，不僅是達不到分離度1.5時的退讓，更有很多達到1.5後的前進，比如分離度應大於10.0。這些數值的製定不僅僅是一個耐用性的探索
，更不是冒險或保守之類的估計
，而是需要具體的試驗設計去驗證。

根據以上信息
，我們可以推斷的是，實際分離效果肯定不止1.1，這(zhe)隻(zhi)是(shi)一(yi)個(ge)最(zui)低(di)可(ke)接(jie)受(shou)限(xian)度(du)。因(yin)此(ci)在(zai)正(zheng)常(chang)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)下(xia)對(dui)方(fang)法(fa)進(jin)行(xing)完(wan)整(zheng)驗(yan)證(zheng)後(hou)，針(zhen)對(dui)希(xi)望(wang)擬(ni)定(ding)的(de)分(fen)離(li)度(du)再(zai)次(ci)進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)設(she)計(ji)以(yi)驗(yan)證(zheng)合(he)理(li)性(xing)。

1
、擬定分析方法耐用性的關鍵參數：碳酸銨溶液濃度、流速、柱溫、色譜柱及儀器。

2、擬(ni)定(ding)關(guan)鍵(jian)耐(nai)用(yong)性(xing)參(can)數(shu)在(zai)日(ri)常(chang)檢(jian)測(ce)中(zhong)可(ke)能(neng)出(chu)現(xian)的(de)偏(pian)離(li)
，比(bi)如(ru)碳(tan)酸(suan)銨(an)溶(rong)液(ye)濃(nong)度(du)由(you)於(yu)配(pei)製(zhi)過(guo)程(cheng)導(dao)致(zhi)的(de)誤(wu)差(cha)，由(you)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)性(xing)能(neng)導(dao)致(zhi)的(de)流(liu)速(su)及(ji)柱(zhu)溫(wen)控(kong)製(zhi)差(cha)異(yi)，色(se)譜(pu)柱(zhu)批(pi)次(ci)間(jian)的(de)差(cha)異(yi)

，不(bu)同(tong)儀(yi)器(qi)（型號、品牌）之間的差異。這些差異均可以根據經驗及相關的性能確認（PQ）進行預先估計
，在估計的基礎上適當放寬考察。

3
、在上述各種擬定的偏離條件下進行分離度考察，確定最差分離度，比如說是在流速2.2ml/min時分離度為最差的1.1。

4、在流速2.2ml/min

，分離度為1.1的條件下，設計雜質A與雜質B的靈敏度（檢測限、定量限），線性與範圍，準確度（加標回收）試驗。此時，我們甚至可以在該條件下兼顧其他雜質的再次驗證。

5
、在最差分離度條件下，各項驗證均滿足擬定的驗證要求時（不一定非得完全按照中國藥典9101的要求），可以合理的製定所希望的分離度或峰穀比。

此ci外wai，尚shang需xu說shuo明ming一yi點dian的de是shi，耐nai用yong性xing不bu是shi通tong過guo性xing驗yan證zheng，無wu需xu擬ni定ding範fan圍wei後hou追zhui求qiu耐nai用yong性xing試shi驗yan的de通tong過guo。耐nai用yong性xing的de參can數shu應ying在zai方fang法fa開kai發fa階jie段duan已yi完wan成cheng邊bian界jie的de探tan索suo，並bing進jin行xing了le初chu步bu的de驗yan證zheng；在方法學驗證階段根據開發時的邊界，適當調整符合實際使用場景的參數偏離範圍並進一步的確認。