一.明視野觀察(Bright field BF)
明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應用於病理、檢驗,用於觀察被染色的切片,所有顯微鏡均能完成此功能。
明視野

二.暗視野觀察(Dark field DF)
anshiyeshijishianchangzhaomingfa。tadetedianhemingshiyebutong,buzhijieguanchadaozhaomingdeguangxian,erguanchadaodeshibeijianwutifanshehuoyanshedeguangxian。yinci,shichangchengweiheiandebeijing,erbeijianwutizechengxianmingliangdexiang。
暗(an)視(shi)野(ye)的(de)原(yuan)理(li)是(shi)根(gen)據(ju)光(guang)學(xue)上(shang)的(de)丁(ding)道(dao)爾(er)現(xian)象(xiang),微(wei)塵(chen)在(zai)強(qiang)光(guang)直(zhi)射(she)通(tong)過(guo)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia),人(ren)眼(yan)不(bu)能(neng)觀(guan)察(cha),這(zhe)是(shi)因(yin)為(wei)強(qiang)光(guang)繞(rao)射(she)造(zao)成(cheng)的(de)。若(ruo)把(ba)光(guang)線(xian)斜(xie)射(she)它(ta),由(you)於(yu)光(guang)的(de)反(fan)射(she),微(wei)粒(li)似(si)乎(hu)增(zeng)大(da)了(le)體(ti)積(ji),為(wei)人(ren)眼(yan)可(ke)見(jian)。
m..m anshiyeguanchasuoxuyaodeteshufujianshianshiyejuguangjing。tadetedianshiburangguangshuyouxiazhishangdetongguobeijianwuti,ershijiangguangxiangaibiantujing,shiqixieshexiangbeijianwuti,shizhaomingguangxianbuzhijiejinruwujing,liyongbeijianwutibiaomianfanshehuoyansheguangxingchengdemingliangtuxiang。anshiyeguanchadefenbianlvyuangaoyumingshiyeguancha,zuigaoda0.02—0.004
暗視野

三.相差鏡檢法(Phase contrast PH)
在光學顯微鏡的發展過程中,相差鏡檢術的發明成功,是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道,人眼隻能區分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),對於無色通明的生物標本,當光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本.
相(xiang)差(cha)顯(xian)微(wei)鏡(jing)利(li)用(yong)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti)的(de)光(guang)程(cheng)之(zhi)差(cha)進(jin)行(xing)鏡(jing)檢(jian),也(ye)就(jiu)是(shi)有(you)效(xiao)地(di)利(li)用(yong)光(guang)的(de)幹(gan)涉(she)現(xian)象(xiang),將(jiang)人(ren)眼(yan)不(bu)可(ke)分(fen)辨(bian)的(de)相(xiang)位(wei)差(cha)變(bian)為(wei)可(ke)分(fen)辨(bian)的(de)振(zhen)幅(fu)差(cha),即(ji)使(shi)是(shi)無(wu)色(se)透(tou)明(ming)的(de)物(wu)質(zhi)也(ye)可(ke)成(cheng)為(wei)清(qing)晰(xi)可(ke)見(jian)。這(zhe)大(da)大(da)便(bian)利(li)了(le)活(huo)體(ti)細(xi)胞(bao)的(de)觀(guan)察(cha),因(yin)此(ci)相(xiang)差(cha)鏡(jing)檢(jian)法(fa)廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)於(yu)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)。
相差圖片

相(xiang)差(cha)顯(xian)微(wei)鏡(jing)的(de)基(ji)本(ben)原(yuan)理(li)是(shi),把(ba)透(tou)過(guo)標(biao)本(ben)的(de)可(ke)見(jian)光(guang)的(de)光(guang)程(cheng)差(cha)變(bian)成(cheng)振(zhen)幅(fu)差(cha),從(cong)而(er)提(ti)高(gao)了(le)各(ge)種(zhong)結(jie)構(gou)間(jian)的(de)對(dui)比(bi)度(du),使(shi)各(ge)種(zhong)結(jie)構(gou)變(bian)得(de)清(qing)晰(xi)可(ke)見(jian)。光(guang)線(xian)透(tou)過(guo)標(biao)本(ben)後(hou)發(fa)生(sheng)折(zhe)射(she),偏(pian)離(li)了(le)原(yuan)來(lai)的(de)光(guang)路(lu),同(tong)時(shi)被(bei)延(yan)遲(chi)了(le)1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光合軸後幹涉加強,振幅增大或減下,提高反差。在構造上,相差顯微鏡有不同於普通光學顯微鏡兩個特殊之處:
1. 環形光闌(annular diaphragm) 位於光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標本上。
2. 相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
1. A 相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸後光波相加,振幅加大,標本結構比周圍介質更加變亮,形成亮反差(或稱負反差)。
2. B 相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸後光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結構比周圍介質更加變暗
相差原理

四.微分幹涉稱鏡檢術(Differential interference contrast DIC)
微分幹涉鏡檢術出現於60年nian代dai,它ta不bu僅jin能neng觀guan察cha無wu色se透tou明ming的de物wu體ti,而er且qie圖tu象xiang呈cheng現xian出chu浮fu雕diao壯zhuang的de立li體ti感gan,並bing具ju有you相xiang襯chen鏡jing檢jian術shu所suo不bu能neng達da到dao的de某mou些xie優you點dian,觀guan察cha效xiao果guo更geng為wei逼bi真zhen。
原理;
微wei分fen幹gan涉she稱cheng鏡jing檢jian術shu是shi利li用yong特te製zhi的de渥wo拉la斯si頓dun棱leng鏡jing來lai分fen解jie光guang束shu。分fen裂lie出chu來lai的de光guang束shu的de振zhen動dong方fang向xiang相xiang互hu垂chui直zhi且qie強qiang度du相xiang等deng,光guang束shu分fen別bie在zai距ju離li很hen近jin的de兩liang點dian上shang通tong過guo被bei檢jian物wu體ti,在zai相xiang位wei上shang略lve有you差cha別bie。由you於yu兩liang光guang束shu的de裂lie距ju極ji小xiao,而er不bu出chu現xian重zhong影ying現xian象xiang,使shi圖tu象xiang呈cheng現xian出chu立li體ti的de三san維wei感gan覺jiao。
微分幹涉圖片

DIC顯微鏡的物理原理完全不同於相差顯微鏡,技術設計要複雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光係統的前麵,使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),erzhechengyixiaojiajiao。juguangqijiangliangshuguangtiaozhengchengyuxianweijingguangzhoupingxingdefangxiang。zuichuliangshuguangxiangweiyizhi,zaichuanguobiaobenxianglindequyuhou,youyubiaobendehouduhezheshelvbutong,yinqileliangshuguangfashengleguangchengcha。zaiwujingdehoujiaomianchuanzhuanglediergeruomasisilengjing,jiDIC滑行器,它把兩束光波合並成一束。
這時兩束光的偏振麵(x和y)仍然存在。最後光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振麵的兩束光,從而使二者發生幹涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;光(guang)程(cheng)差(cha)值(zhi)等(deng)於(yu)波(bo)長(chang)一(yi)半(ban)時(shi),穿(chuan)過(guo)的(de)光(guang)達(da)到(dao)最(zui)大(da)值(zhi)。於(yu)是(shi)在(zai)灰(hui)色(se)的(de)背(bei)景(jing)上(shang),標(biao)本(ben)結(jie)構(gou)呈(cheng)現(xian)出(chu)亮(liang)暗(an)差(cha)。為(wei)了(le)使(shi)影(ying)像(xiang)的(de)反(fan)差(cha)達(da)到(dao)最(zui)佳(jia)狀(zhuang)態(tai),可(ke)通(tong)過(guo)調(tiao)節(jie)DIC滑行器的縱行微調來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑(hua)行(xing)器(qi)可(ke)使(shi)標(biao)本(ben)的(de)細(xi)微(wei)結(jie)構(gou)呈(cheng)現(xian)出(chu)正(zheng)或(huo)負(fu)的(de)投(tou)影(ying)形(xing)象(xiang),通(tong)常(chang)是(shi)一(yi)側(ce)亮(liang),而(er)另(ling)一(yi)側(ce)暗(an),這(zhe)便(bian)造(zao)成(cheng)了(le)標(biao)本(ben)的(de)人(ren)為(wei)三(san)維(wei)立(li)體(ti)感(gan),類(lei)似(si)大(da)理(li)石(shi)上(shang)的(de)浮(fu)雕(diao)
微分幹涉原理圖

五.偏光顯微鏡(Polarizing microscope POL )
偏光顯微鏡的特點
pianguangxianweijingshijiandingwuzhixiweijiegouguangxuexingzhideyizhongxianweijing。fanjuyoushuangzheshedewuzhi,zaipianguangxianweijingxiajiunengfenbiandeqingchu,dangranzhexiewuzhiyekeyongransefalaijinxingguancha,danyouxiezebukeneng,erbixuliyongpianguangxianweijing。
偏光顯微鏡的特點,就是將普通改變為偏光進行鏡檢的方法,以鑒別某一物質是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。
雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物,化學等領域。在生物學和植物學也有應用。
六.浮雕相襯顯微鏡(RC HMC )
1975年,Robert Hoffman 博士發明
2002年,專利到期,各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術產品
原理
斜射光照射到標本產生折射、衍射,光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影,從而使透明標本表麵產生明暗差異,增加觀察對比度
特點
提高未染色標本的可見性和對比度;
圖象顯示陰影或近似三維結構而不會產生光暈;
可檢測雙折射物質(岩石切片、水晶、骨頭) ;
可檢測玻璃,塑料等培養皿中的細胞,器官和組織;
聚光鏡的工作距離可以設計的更長;
RC物鏡也可用於明場,暗場和熒光觀察
七:熒光顯微鏡(Fluorescence Microscopy FL)
熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發後而產生長波長的熒光,然後觀察。
熒光圖象

優點:
檢出能力高(放大作用)
對細胞的刺激小(可以活體染色)
能進行多重染色
用途:
物體構造的觀察——熒光素
熒光的有無、色調比較進行物質判別——抗體熒光等
發熒光量的測定對物質定性、定量分析
熒光原理圖

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