在光學顯微鏡下無法看清小於0.2µm的細微結構,這些結構稱為亞顯微結構(submicroscopic structures)或超微結構(ultramicroscopic structures;ultrastructures)。要想看清這些結構,就必須選擇波長更短的光源,以提高顯微鏡的分辨率。1932年Ruska發明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM),電子束的波長要比可見光和紫外光短得多,並且電子束的波長與發射電子束的電壓平方根成反比,也就是說電壓越高波長越短。目前TEM的分辨力可達0.2nm。
電dian子zi顯xian微wei鏡jing與yu光guang學xue顯xian微wei鏡jing的de成cheng像xiang原yuan理li基ji本ben一yi樣yang,所suo不bu同tong的de是shi前qian者zhe用yong電dian子zi束shu作zuo光guang源yuan,用yong電dian磁ci場chang作zuo透tou鏡jing。另ling外wai,由you於yu電dian子zi束shu的de穿chuan透tou力li很hen弱ruo,因yin此ci用yong於yu電dian鏡jing的de標biao本ben須xu製zhi成cheng厚hou度du約yue50nm左右的超薄切片。這種切片需要用超薄切片機(ultramicrotome)製作。電子顯微鏡的放大倍數最高可達近百萬倍、由電子照明係統、電磁透鏡成像係統、真空係統、記錄係統、電源係統等5部分構成。
不同光源的波長
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名 稱 |
可見光 |
紫外光 |
X射線 |
α射線 |
電子束 | |
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0.1Kv |
10Kv | |||||
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波長(nm) |
390~760 |
13~390 |
0.05~13 |
0.005~1 |
0.123 |
0.0122 |
JEM-1011透射電子顯微鏡
2、製樣技術
1)超薄切片
通常以鋨酸和戊二醛固定樣品,以環氧樹脂包埋,以熱膨脹或螺旋推進的方式推進樣品切片(圖2-13),切片厚度20~50nm,切片采用重金屬鹽染色,以增大反差。
萊卡超薄切片機
內質網透射電鏡圖(偽彩色)
2)負染技術
負染就是用重金屬鹽(如磷鎢酸、醋酸雙氧鈾)對鋪展在載網上的樣品進行染色;吸去染料,樣品幹燥後,樣品凹陷處鋪了一薄層重金屬鹽,而凸的出地方則沒有染料沉積,從而出現負染效果(圖2-15),分辨力可達1.5nm左右。
肌動蛋白纖維的負染電鏡照片
3)冰凍蝕刻
冰凍蝕刻(freeze-etching)亦稱冰凍斷裂(freeze-fracture)。標本置於-100˚C的幹冰或-196˚C的液氮中,進行冰凍。然後用冷刀驟然將標本斷開,升溫後,冰在真空條件下迅即升華,暴露出斷麵結構,稱為蝕刻(etching)。蝕刻後,向斷麵以45度角噴塗一層蒸汽鉑,再以90度角噴塗一層碳,加強反差和強度。然後用次氯酸鈉溶液消化樣品,把碳和鉑的膜剝下來,此膜即為複膜(replica)。複膜顯示出了標本蝕刻麵的形態,在電鏡下得到的影像即代表標本中細胞斷裂麵處的結構。
冰凍蝕刻電鏡照片
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