1.30%丙烯酰胺溶液
【配製方法】將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶於總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之,補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應不大於7.0,置棕色瓶中保存於室溫。
【注意】丙bing烯xi酰xian胺an具ju有you很hen強qiang的de神shen經jing毒du性xing並bing可ke以yi通tong過guo皮pi膚fu吸xi收shou,其qi作zuo用yong具ju累lei積ji性xing。稱cheng量liang丙bing烯xi酰xian胺an和he亞ya甲jia雙shuang丙bing烯xi酰xian胺an時shi應ying戴dai手shou套tao和he麵mian具ju。可ke認ren為wei聚ju丙bing烯xi酰xian胺an無wu毒du,但dan也ye應ying謹jin慎shen操cao作zuo,因yin為wei它ta還hai可ke能neng會hui含han有you少shao量liang未wei聚ju合he材cai料liao。一yi些xie價jia格ge較jiao低di的de丙bing烯xi酰xian胺an和he雙shuang丙bing烯xi酰xian胺an通tong常chang含han有you一yi些xie金jin屬shu離li子zi,在zai丙bing烯xi酰xian胺an貯zhu存cun液ye中zhong加jia入ru大da約yue0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然後用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。
2.40%丙烯酰胺
【配製方法】把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶於總體積為600ml的蒸餾水中。繼續按上述配製30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解後應以蒸餾水補足至終體積為1L。
【注意】見上述配製30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用於DNA序列測定。
3.放線菌素D溶液
【配製方法】把20mg放線菌素D溶解於4ml 100%乙醇中,1:10稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化係數為21,900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存於-20℃。
【注意】放線菌素D是shi致zhi畸ji劑ji和he致zhi癌ai劑ji,配pei製zhi該gai溶rong液ye時shi必bi須xu戴dai手shou套tao並bing在zai通tong風feng櫥chu內nei操cao作zuo,而er不bu能neng在zai開kai放fang在zai實shi驗yan桌zhuo麵mian上shang進jin行xing,謹jin防fang吸xi入ru藥yao粉fen或huo讓rang其qi接jie觸chu到dao眼yan睛jing或huo皮pi膚fu。
藥廠提供的作治療用途的放線菌素D製品常含有糖或鹽等添加劑。隻要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度,這類製品便可用於抑製自身引導作用。
4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
【配製方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存於-70℃
5.10mol/L乙酸酰溶液
【配製方法】把770g乙酸酰溶解於800ml水中,加水定容至1L後過濾除菌。
6.10%過硫酸銨溶液
【配製方法】把1g過硫酸銨溶解於終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數周。
7.BCIP溶液
【配製方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解於10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存於4℃
8.2×BES緩衝鹽溶液
【配製方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室溫下用HCl調節 該溶液的pH值至6.96、然後加入蒸餾水定容至100ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成小份,保存於-20℃。
9.1mol/L CaCl2溶液
【配製方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存於-20℃。
【注意】製備感受態細胞時,取出一小份解凍並用蒸餾水稀釋至100ml,用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,然後驟冷至0℃。
10.2.5mol/L CaCl2溶液
【配製方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存於-20℃。
11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液
【配製方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾除菌後分裝成1ml小份貯存於-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。
12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
【配製方法】把每一種dNTP溶解於水至濃度各為100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調節 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測),把中和後的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋,在給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度,然後用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP,分裝成小份貯存於-70℃。
13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配製方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調節 溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然後定容至1L,分裝後高壓滅菌備用。
【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調至接近8.0,才能完全溶解。
14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)
【配製方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然後用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存於室溫。
【注意】小心:溴化乙錠是強誘變劑並有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴麵罩。
15.2×HEPES緩衝鹽溶液
【配製方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH調節 pH值至7.05,再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存於-20℃。
16.IPTG溶液
【配製方法】IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3),在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG後,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存於-20℃。
17.1mol/L乙酸鎂溶液
【配製方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂,用水定容至1L過濾除菌。
18.1mol/L MgCl2溶液
【配製方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O,用水定容至1L,分裝成小份並高壓滅菌備用。
【注意】MgCl2極易潮解,應選購小瓶(如100g)試劑,啟用新瓶後勿長期存放。
19.β-巰基乙醇(BME)溶液
【配製方法】一般得到的是14.4mol/L溶液,應裝在棕色瓶中保存於4℃。
【注意】BME或含有BME的溶液不能高壓處理。
20.NBT溶液
【配製方法】把0.5g氯化氮藍四唑溶解於10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存於4℃。
21.酚/氯仿溶液
【配製方法】把酚和氯仿等體積混合後用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上麵覆蓋等體積的0.01mol/l Tris?HCl(pH7.6)液層,保存於4℃。
【注意】fenfushixinghenqiang,bingkeyinqiyanzhongzhuoshang,caozuoshiyingdaishoutaojifanghujing,chuanfanghufu。suoyoucaozuojunyingzaihuaxuetongfengchuzhongjinxing。yufenjiechuguodebuweipifuyingyongdaliangdeshuiqingxi,bingyongfeizaoheshuixidi,jiyongyichun。
22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液
【配製方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份貯存於-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。
【注意】PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收後有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量水衝洗之。凡被PMSF汙染的衣物應予丟棄。PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加於裂解緩衝液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高於4℃。pH值為8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調節 為堿性(pH>8.6)並在室溫放置數小時後,可安全地予以丟棄。
23.磷酸鹽緩衝溶液(PBS)溶液
【配製方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調節 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存於室溫。
24.1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液
【配製方法】將9.82g乙酸鉀溶解於90ml純水中,用2mol/L乙酸調節 pH值至7.5後加入純水定容到1L,保存於-20℃。
25.乙酸鉀溶液(用於堿裂解)
【配製方法】在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。
26.3mol/L乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液
【配製方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調節 pH值至5.2或用稀乙酸調節 pH值至7.0,加水定容到1L,分裝後高壓滅菌。
27.5mol/L NaCl溶液
【配製方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分裝後高壓滅菌。
28.10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液
【配製方法】在900ml水中溶解100g電泳級SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分裝備用。
【注意】SDS的微細晶粒易擴散,因此稱量時要戴麵罩,稱量完畢後要清除殘留在稱量工作區和天平上的SDS,10%SDS溶液無須滅菌。
29.20×SSC溶液
【配製方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉,加入數滴10mol/l NaOH溶液調節 pH值至7.0,加水定容至1L,分裝後高壓滅菌。
30.20×SSPE溶液
【配製方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液調節 pH值至7.4(約需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分裝後高壓滅菌。
31.100%三氯乙酸溶液
【配製方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。
32.1mol/L Tris溶液
【配製方法】在800ml水中溶解121.91g Tris堿,加入濃HCl調節 pH值至所需值。應使溶液冷至室溫後方可最後調定pH值,加水定容至1L,分裝後高壓滅菌。
【注意】如1mol/L溶液呈現黃色,應予丟棄並置備質量更好的Tris。
盡管多種類型的電極均不能準確測量Tris溶液的pH值,但仍可向大多數廠商購得合適的電極。Tris溶液的pH值因溫度而異,溫度每升高1℃,pH值大約降低0.03個單位。例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。
33.Tris緩衝鹽溶液(TBS)(25mmol/l Tris)
【配製方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿,加入0.015g酚並用HCl調至pH值至7.4,用蒸餾水定容至1L,分裝後在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min,於室溫保存。
34.X-gal溶液
【配製方法】X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配製成的20mg/ml的貯存液。保存於一玻璃管或聚丙烯管中,裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞,並應貯存於-20℃。X-gal溶液無須過濾除菌。
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