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適用場景一
產前檢查同種免疫抗體引起的HDFN的可能性。
1、定義：胎兒新生兒溶血病(HDFN)是shi指zhi因yin胎tai母mu血xue型xing不bu合he，通tong過guo胎tai母mu輸shu血xue，母mu體ti針zhen對dui與yu其qi不bu同tong的de胎tai兒er紅hong細xi胞bao血xue型xing抗kang原yuan產chan生sheng相xiang應ying抗kang體ti經jing胎tai盤pan進jin入ru胎tai兒er血xue液ye循xun環huan，導dao致zhi胎tai兒er或huo新xin生sheng兒er同tong種zhong免mian疫yi性xing溶rong血xue引yin起qi的de一yi係xi列lie臨lin床chuang症zheng狀zhuang。
2、適用範圍：Rh及ABO血型係統血型不合引起的溶血病最常見。其他血型係統，如MNSs、Kell、Kidd、Duffy、Lewis、Diego等血型係統也可導致新生兒溶血病。而ABO-HDFN和抗-M-HDFN目前較常見的、可發生第一胎，母體常常存在IgM+IgG的抗-A/B、抗-M，進行母體血抗體效價檢測時，需要使用巰基試劑滅活IgM抗體活性，以便檢測共存的IgG抗體。
3、操作步驟：
3.1 0.2M的2-Me或0.01mol/L DTT與受檢母體血清在試管內等量混合，加塞置室溫30分鍾（或37℃ 10分鍾）
3.2 處理後血清用鹽水倍量稀釋，每管50μl，稀釋到第10管
3.3 每管加相應3%（A/B/MN）紅細胞鹽水懸液50μl，以3400轉／分1000g離心後15秒後，肉眼觀察，記錄鹽水介質凝集效價
3.4 37℃孵育30分鍾，三洗，用抗人球法檢測IgG抗體效價
4、結果判定：當抗球蛋白介質凝集效價大於等於鹽水介質凝集效價二管（4倍）時，可以認為抗球蛋白介質凝集效價即為IgG抗體效價。
注意事項：由於開始血清已被2-Me稀釋1倍，因此倍比稀釋的第一管時為4倍稀釋。
適用場景二
解離IgM抗體引起的自身凝集[1]
1、原理：巰基試劑可以裂解將單體亞單位連接成五聚體IgM分(fen)子(zi)的(de)二(er)硫(liu)鍵(jian)，這(zhe)種(zhong)五(wu)聚(ju)體(ti)分(fen)子(zi)可(ke)以(yi)呈(cheng)冷(leng)凝(ning)集(ji)自(zi)身(shen)抗(kang)體(ti)性(xing)質(zhi)，與(yu)自(zi)身(shen)紅(hong)細(xi)胞(bao)的(de)反(fan)應(ying)發(fa)生(sheng)凝(ning)集(ji)。巰(qiu)基(ji)試(shi)劑(ji)可(ke)以(yi)消(xiao)除(chu)紅(hong)細(xi)胞(bao)的(de)自(zi)發(fa)凝(ning)集(ji)，為(wei)血(xue)型(xing)提(ti)供(gong)不(bu)凝(ning)集(ji)的(de)標(biao)本(ben)。
2、適用範圍：本方法常用於IgM抗體致敏的紅細胞幹擾ABO血型正定型。
3、操作步驟：
3.1 用生理鹽水稀釋紅細胞濃度為50%。
3.2 在紅細胞中加入等量的0.01mol/L DTT或0.1mol/L 2-ME。
3.3 37℃孵育10min(2-ME)或15min(DTT)。
3.4 用生理鹽水洗滌紅細胞3次。
3.5 用生理鹽水將紅細胞稀釋至適合的濃度，用於血型檢測。
適用場景三
處理紅細胞後進行自身抗體的吸收
1、原理：ZZAP試劑由1%半胱氨酸激活的木瓜酶溶液、0.2M DTT,PH 6.5 PBS組成，聯合應用蛋白酶（木瓜酶或無花果酶）和二硫蘇糖醇（DTT），破壞和解離紅細胞膜上抗體。IgG分子經巰基試劑處理後增加對蛋白酶消化的敏感性。當包被了IgG分子紅細胞用ZZAP 試劑處理後，IgG分子失去其完整性，並從紅細胞膜上解離下來，蛋白酶的作用是增加處理後紅細胞的吸收能力。
2、適用範圍：用(yong)於(yu)在(zai)免(mian)疫(yi)溶(rong)血(xue)性(xing)疾(ji)病(bing)的(de)實(shi)驗(yan)診(zhen)斷(duan)中(zhong)處(chu)理(li)紅(hong)細(xi)胞(bao)，用(yong)於(yu)吸(xi)附(fu)除(chu)去(qu)血(xue)清(qing)標(biao)本(ben)中(zhong)遊(you)離(li)的(de)溫(wen)自(zi)身(shen)抗(kang)體(ti)和(he)冷(leng)自(zi)身(shen)抗(kang)體(ti)，對(dui)其(qi)中(zhong)的(de)同(tong)種(zhong)異(yi)體(ti)抗(kang)體(ti)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)。也(ye)可(ke)用(yong)於(yu)消(xiao)除(chu)自(zi)身(shen)紅(hong)細(xi)胞(bao)凝(ning)集(ji)現(xian)象(xiang)。
3、操作步驟：
3.1冷抗體自身吸收
3.1.1 將ZZAP試劑2m1加入2m1壓積的自身紅細胞，混合，37℃，20-30min。
3.1.2 生理鹽水洗滌3次，最後一次徹底去除上清。
3.1.3 加入2m1自身血清，混合，4℃，30-40min。
3.1.4 900-1000g離心4-5min，將血清移至另一幹淨的試管中。
3.1.5 如吸收效果不滿意，可重複步驟3.1.1至3.1.4。
3.1.6 最後一次吸收後用試劑紅細胞檢測血清中的同種異體抗體。
3.2 溫自身抗體的自身吸收
3.2.1取兩支試管，各加1m1壓積的自身紅細胞，2m1 ZZAP試劑混合，不時搖動試管，37℃，20-30min。
3.2.2生理鹽水洗滌細胞3次，最後一次徹底除去上清。
3.2.3加入同體積血清至ZZAP 處理過的紅細胞，混合，37℃，20-45min。
3.2.4 900-1000g離心4-5min，收集血清。
3.2.5重複步驟3、4，將血清再吸收一次，離心，收集血清。
3.2.6用該血清與紅細胞譜試劑反應，檢測同種異體抗體。
3.3.ZZAP處理異源紅細胞吸收病人自身抗體
3.3.1 R1R1、R2R2、rr三種O型紅細胞，生理鹽水洗滌紅細胞，離心壓積，去除上清。
3.3.2 每一體積細胞加入兩體積的ZZAP試劑，混勻，37℃，20-30min，不斷搖動。
3.3.3 生理鹽水洗滌紅細胞3次，最後一次徹底去除上清。
3.3.4 將處理的紅細胞與病人血清同體積混合，37℃，30-60min，不斷搖動。
3.3.5 900-1000g離心4-5min，收集血清。
3.3.6 將吸收過的血清與新的紅細胞（與吸收用的紅細胞為同一人份）混合，如反應，重複吸收過程直至無反應。
3.3.7 用吸收過的血清與紅細胞譜試劑反應，檢測同種異體抗體。比較存在和除去的同種異體抗體活性。
適用場景四
處理紅細胞後進行抗體檢測
1、原理：二硫蘇糖醇（DTT）是(shi)有(you)效(xiao)的(de)還(hai)原(yuan)劑(ji)，能(neng)破(po)壞(huai)半(ban)胱(guang)氨(an)酸(suan)殘(can)基(ji)之(zhi)間(jian)的(de)共(gong)價(jia)鍵(jian)，從(cong)而(er)影(ying)響(xiang)抗(kang)原(yuan)蛋(dan)白(bai)的(de)二(er)級(ji)結(jie)構(gou)。根(gen)據(ju)蛋(dan)白(bai)結(jie)構(gou)識(shi)別(bie)抗(kang)原(yuan)的(de)抗(kang)體(ti)在(zai)抗(kang)原(yuan)蛋(dan)白(bai)結(jie)構(gou)破(po)壞(huai)後(hou)不(bu)與(yu)該(gai)抗(kang)原(yuan)反(fan)應(ying)。KELL血型係統抗原對DTT非常敏感。Knops血型係統抗體及抗-LWa,抗 -Yta, 抗-Ytb, 抗-Doa, 抗-Dob, 抗-Gya, 抗-Hy和抗-Joa等抗體不與DTT處理後的細胞處理。
2、適用範圍：這種抑製技術有助於識別部分抗體或確定血清是否含有其他潛在的同種抗體和靶向藥物達雷妥尤（抗-CD38）幹擾的不規則抗體篩選、交叉配血等血清學試驗。
3、操作步驟
3.1 DTT溶液（0.2 M DTT ，pH 8）和PBS洗滌的壓積紅細胞以4：1混合。
3.2 在37℃孵育30～45分鍾,每5分鍾混勻一次。推薦30min以上
3.3 用PBS洗滌4次。可能發生輕微的溶血；如果溶血過多，可使用略小體積的DTT（2-3倍體積）洗滌新鮮的紅細胞，重複以上步驟。推薦3400r，1min
3.4 用PBS製成2%～5%紅細胞懸液。
3.5 用含有可疑抗體的血清測試DTT處理的細胞。
3.6 選擇E+紅細胞為陽性對照細胞，K+紅細胞為陰性對照。DTT處理後分別用抗-E和抗-K血清測試對應的細胞，陽性細胞出現陽性反應，陰性細胞陰性反應才可證明DTT處理有效。
適用場景五
轉化IgG型抗體直接凝集細胞[2]
1、原理：IgG型抗體分子有抗體重鏈和兩條輕鏈由二硫鍵（S-S）連接而成。使用巰基試劑去除連接在兩條重鏈的二硫鍵能增加IgG鉸鏈區的靈活性，能增加IgG分子的Fab端抗原結合位點之間的距離，修飾後的IgG型分子在低蛋白介質（鹽水）中能直接凝集紅細胞。
2、適用範圍：將紅細胞致敏後不能導致紅細胞凝集效價≥32的IgG型抗體轉化為能直接凝集紅細胞的IgG型抗體。
3、操作步驟：
3.1 準備2支試管分別加入1mL含有效價≥32的IgG型抗體的血清。
3.2 1支試管中加入1mL 0.01mol/L DTT，另一支對照試管中加入1mL pH 7.3 PBS。
3.3 室溫孵育30分鍾或37℃ 15min。
3.4 加入存在該IgG型抗體特異性抗原的紅細胞後立即離心 3100r/min 15秒，立即肉眼觀察並記錄結果。
4.注意事項：
1）對照管不能凝集紅細胞說明試驗成立。
2）檢測管血清能直接凝集紅細胞，說明IgG型抗體轉化成功；如檢測管血清不能直接凝集紅細胞，說明IgG型抗體轉化不成功，可能因為抗體效價低的原因。
參考文獻：
[1] 沈偉，陳偉．劉鳳霞.紅細胞血清學技術 [M].長沙：中南大學出版社，2022：176.
[2] W John Judd, Susan T Johnson, Jill Storry, et al. Judd's Methods in Immunohematology 3rd[M]. Bethesda MD:AABB Press, 2008,p239.
