一、概要
 玉米赤黴烯酮（Zearalenone，ZEN）又稱F-2 毒素
，主要成分為禾穀鐮刀菌和黃色鐮刀菌等產生的2，4-二羥基苯甲酸內酯類化合物。ZEN 主要汙染玉米
、麥類
、穀物等作物，具有很強的雌性激素作用
，可引起豬
、大鼠、小鼠、家禽等動物的雌激素過多症和嚴重的生殖道症狀及不孕症，還具有免疫毒性、基因毒性等，對人也有雌激素作用。玉米赤黴烯酮一般用薄層色譜
、高效液相色譜法檢測, 但因其操作繁雜
、費用昂貴而影響實際應用。而使用玉米赤黴烯酮ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中玉米赤黴烯酮殘留。
 本試劑盒是應用ELISA技術研發的新一代真菌毒素檢測產品

，操作時間低於60min
，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二
、試驗原理
 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被玉米赤黴烯酮抗原
，樣本中玉米赤黴烯酮和此抗原競爭玉米赤黴烯酮的抗體，酶標二抗催化TMB底di物wu顯xian色se，樣yang本ben吸xi光guang值zhi與yu其qi含han有you的de玉yu米mi赤chi黴mei烯xi酮tong成cheng負fu相xiang關guan，與yu標biao準zhun曲qu線xian比bi較jiao再zai乘cheng以yi其qi對dui應ying的de稀xi釋shi倍bei數shu，即ji可ke得de出chu樣yang品pin中zhong玉yu米mi赤chi黴mei烯xi酮tong的de含han量liang。

三、適用範圍
可定性、定量檢測玉米及玉米製品



、飼料等樣本中的玉米赤黴烯酮。

四、交叉反應率
玉米赤黴烯酮……………………………………………100%
玉米赤黴酮…………………………………………13%
玉米赤黴醇…………………………………………＜1%

五、檢測步驟
測定前應須知：
1
、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之後立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決於洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中
，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
5
、標品裏含有玉米赤黴烯酮，操作時應戴手套操作
，避免皮膚接觸。

操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出
，置於室溫（20～25℃）平衡30min以上
，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔板放進原錫箔袋中並且與提供的幹燥劑一起重新密封，保存於2～8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行

，並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5
、加標準品/樣本：加標準品/樣本50l到對應的微孔中
，再加入ZEN酶標物50l/孔，最後加入ZEN抗試劑50l/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置室溫避光環境中反應30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜
，將孔內液體甩幹
，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s
，用吸水紙拍幹（拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置室溫避光環境反應15min~20min。
8、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測
，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止用目測法可進行判定)。


六、檢測方法靈敏度

、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
回收率：
玉米：95±10%
飼料：90±15%
精密度：
試劑盒的變異係數均小於10%

七、注意事項
1
、室溫低於20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況
，則會出現標準曲線不成線性，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
3
、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5
、不要使用過了有效日期的試劑盒
；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑
，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6

、儲存條件
保存試劑盒於2～8℃
，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小於0.5（A450nm<0.5）時
，表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液後，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min（或更長），但不得超過30min。反之
，則減短反應時間。
9、濃縮洗滌液如有結晶屬正常現象，請加熱溶解後使用。
10、該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒於2～8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。