一、概要
萊克多巴胺(Ractopamine,RAC)是一種苯乙醇胺類β2-腎shen上shang腺xian素su受shou體ti激ji動dong劑ji,具ju有you廣guang泛fan的de生sheng理li效xiao應ying,臨lin床chuang上shang主zhu要yao用yong於yu治zhi療liao支zhi氣qi管guan哮xiao喘chuan,衝chong血xue性xing心xin力li衰shuai竭jie症zheng和he肌ji肉rou萎wei縮suo症zheng等deng。當dang其qi用yong量liang高gao於yu臨lin床chuang用yong量liang的de5~10倍bei時shi,能neng調tiao節jie體ti內nei代dai謝xie,增zeng加jia脂zhi肪fang分fen解jie,促cu進jin蛋dan白bai合he成cheng,表biao現xian出chu營ying養yang再zai分fen配pei效xiao應ying。添tian加jia於yu飼si料liao中zhong,極ji大da的de提ti高gao了le家jia畜chu的de瘦shou肉rou率lv。當dang人ren食shi用yong含han有you萊lai克ke多duo巴ba胺an的de動dong物wu組zu織zhi後hou,極ji易yi產chan生sheng心xin跳tiao加jia快kuai、震顫、心悸等中毒反應,更嚴重的會導致人體致畸致癌。 萊克多巴胺檢測試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品,能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
萊克多巴胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISAfangfa,zaimeibiaobanweikongtiaoshangyubaobeilaikeduobaankangyuan,yangbencanliudelaikeduobaanheweikongtiaoshangyubaobeidekangyuangongtongjingzhengkanglaikeduobaankangti,jiarumeibiaoerkanghou,jiaruTMB底di物wu顯xian色se,樣yang本ben吸xi光guang度du值zhi與yu其qi殘can留liu物wu萊lai克ke多duo巴ba胺an呈cheng負fu相xiang關guan,與yu標biao準zhun曲qu線xian比bi較jiao再zai乘cheng以yi其qi對dui應ying的de稀xi釋shi倍bei數shu,即ji可ke得de出chu樣yang品pin中zhong萊lai克ke多duo巴ba胺an的de含han量liang。
三、適用範圍:
萊克多巴胺檢測試劑盒可定性、定量檢測動物組織、飼料、尿液等樣本中萊克多巴胺的殘留量。
四、交叉反應率
萊克多巴胺 ……………………………………… 100%
多巴酚丁胺 …………………………………………小於1%
鹽酸多巴胺?…………………………………………小於1%
克侖特羅 ………………………………………小於1%
沙丁胺醇 …………………………………………小於1%
五、提供的材料與試劑
酶標板、標準品×5瓶*、萊克多巴胺高濃度標準品100ppb、萊克多巴胺抗試劑、萊克多巴胺酶標物、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液(10×) 萊克多巴胺濃縮樣品稀釋液(2×)
六、操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環境中取出,置於室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存於2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5 加標準品/樣本:加標準品/樣本50l/孔到對應的微孔中,然後加入萊克多巴胺抗試劑50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩幹,用洗滌工作液250l/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、加酶標物:加入萊克多巴胺酶標物100l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min,取出重複洗板步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應15~20min。
9、測定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀於450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內讀完數據),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
七、方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.1ppb
樣本最低檢測限:
動物組織…………………………………0.1ppb
飼料樣本……………………………………5ppb
尿液樣本……………………………………0.1ppb
回收率:
動物組織………………………………………80±10%
飼料樣本………………………………………80±10%
尿液樣本………………………………………80±10%
精密度:試劑盒的變異係數均小於10%
八、注意事項
1、室溫低於20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況,則會出現標準曲線不成線性,重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒於2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質,應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小於0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液後,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到30min。反之,則減短反應時間。
9、該試劑盒最佳反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒於2~8℃。
保存期:該產品有效期為12個月。
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