一、概要
 孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，又名堿性綠、嚴基塊綠
、孔雀綠
，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶於水
，溶液呈藍綠色。長期以來，漁民都用它來預防魚的水黴病、鰓黴病、小瓜蟲病等
，而且為了使鱗受損的魚延長生命，在運輸過程中和存放池內，也常使用孔雀石綠。
 孔雀石綠檢測試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
 孔雀石綠檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方(fang)法(fa)
，在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)微(wei)孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被(bei)孔(kong)雀(que)石(shi)綠(lv)抗(kang)原(yuan)，樣(yang)品(pin)殘(can)留(liu)的(de)孔(kong)雀(que)石(shi)綠(lv)和(he)微(wei)孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被(bei)的(de)抗(kang)原(yuan)共(gong)同(tong)競(jing)爭(zheng)抗(kang)孔(kong)雀(que)石(shi)綠(lv)抗(kang)體(ti)，加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang)後(hou)
，經(jing)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中孔雀石綠的含量。

三、適用範圍
 孔雀石綠檢測試劑盒可定性、定量檢測魚池或者魚缸水樣中的孔雀石綠殘留。

四、交叉反應率
顯性孔雀石綠 ……………………………………………100%
結晶紫 ……………………………………………………180%

五、檢測步驟
測定前應須知：
 1
、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
 2、使用之後立即將所有試劑放回2～8℃。
 3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決於洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
 4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
 操作步驟：
 1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置於室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2

、取出需要數量的微孔板
，將不用的微孔放入自封袋，保存於2～8℃。
 3
、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4
、編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行
，並記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
 5  加標準品/樣品：加標準品/樣品50μl/孔到對應的微孔中
，然後加入抗試劑50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min。
 6

、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩幹
，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s
，用吸水紙拍幹（拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
 7
、加酶標物：加入酶標物100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min，取出重複洗板步驟6。
 8
、顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應15～20min。
 9
、測定：加入終止液50μl/孔
，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。

六、孔雀石綠檢測試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測限：
水樣………………………………………………………0.2ppb
回收率：
水樣……………………………………………………100±10%
精密度：試劑盒的變異係數均小於10%

七
、注意事項
 1、整個樣品處理過程要迅速，不應放置過長
，以防影響檢測結果。
 2、室溫低於20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
 3、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會出現標準曲線不成線性
，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
 4、每加一種試劑前需將其搖勻。
 5、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
 6、不要使用過了有效日期的試劑盒；不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
 7
、儲存條保存試劑盒於2～8℃，不要冷凍
，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
 8、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小於0.5（A450nm<0.5）時
，表示試劑可能變質。
 9、濃縮洗滌液內部如有結晶屬正常現象，請加熱溶解後使用。
 10、在加入底物液A液和底物液B液後

，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min。反之，則減短反應時間。
 11、該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒於2～8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。