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一、引言
根據FDA的規定1，手性色譜已經成為藥物開發早期為通過藥理學、毒理學和臨床信息準確鑒定單一純對映體並進行分離的首選工具。
超臨界流體色譜（SFC）因其具有更高的效率、更大的通量和更寬的適用性而被證實成為手性化合物分離的一種主流技術。手性SFC越來越受到關注並且其應用範圍不斷擴大，在一些情況下逐漸成為首選方法。
通常情況下，對映體混合物含有一定數量的雜質，對於常用的疊加進樣和基於信號閾值的收集策略而言（例如UV/ PDA檢測），這zhe些xie雜za質zhi可ke降jiang低di實shi際ji純chun化hua過guo程cheng的de效xiao率lv。多duo數shu情qing況kuang下xia，進jin行xing一yi步bu預yu淨jing化hua是shi必bi要yao的de，但dan因yin存cun在zai資zi金jin和he工gong作zuo量liang限xian製zhi卻que是shi不bu實shi際ji的de。這zhe需xu要yao一yi種zhong能neng將jiang對dui映ying體ti與yu其qi它ta雜za質zhi鑒jian別bie開kai來lai的de多duo功gong能neng檢jian測ce方fang案an。除chu了leUV/PDA檢測器之外，3100型質譜檢測器是一種可廣泛用於手性分離的理想選擇。
在本應用文獻中，展示了質譜引導的Prep 100 SFC係(xi)統(tong)及(ji)其(qi)在(zai)開(kai)放(fang)床(chuang)式(shi)平(ping)台(tai)上(shang)進(jin)行(xing)疊(die)加(jia)進(jin)樣(yang)和(he)收(shou)集(ji)的(de)功(gong)能(neng)，並(bing)被(bei)證(zheng)實(shi)是(shi)一(yi)種(zhong)手(shou)性(xing)化(hua)合(he)物(wu)純(chun)化(hua)的(de)有(you)效(xiao)工(gong)具(ju)。下(xia)文(wen)回(hui)顧(gu)並(bing)描(miao)述(shu)了(le)用(yong)於(yu)手(shou)性(xing)分(fen)離(li)案(an)例(li)的(de)係(xi)統(tong)配(pei)置(zhi)和(he)方(fang)法(fa)。
二、試驗
化學品
CO2由Airgas（Salem，NH，USA）公司提供，並以加壓液體的形式在大約1100 - 1300 psi的條件下，通過內置管道供應給質譜引導的Prep 100 SFC係統。甲醇和反式芪氧化物（T SO，MW：196）由Sigma-Aldrich（St.Louis,MO ,USA）提供。
SFC色譜柱
ChiralPak AD-H和ChiralCel OD-H（均為 21 mm x 250 mm、5 μm）由Chiral Technologies公司（West Chester，PA，USA）提供。
SFC係統
質譜引導的Prep 100 SFC係統配備一個附加的疊加進樣器。
2767型樣品管理器配置為一個簡化型重複餾分收集器
三、方法條件
SFC梯度和流速程序
對於所述的全部數據而言，100 g/分鍾的最大總流速與各種等度的改性劑程序配合使用。
質譜檢測器的條件
用於各種試驗的3100型質譜檢測器標準ESI模式使用以下關鍵參數：
毛細管電壓： 3.5 KV
錐孔電壓： 40.0 V
二級錐孔電壓： 3.0 V
射頻透鏡電壓： 0.1 V
源溫度： 150 °C
脫溶劑氣溫度： 350 °C
脫溶劑氣體流速： 400 L/小時
錐孔氣體流速： 60 L/小時
0.1%的甲酸-甲醇溶液用作補償液流進入質譜，以提高電離效率。
數據管理：MassLynx/FractionLynx，第4.1版
四、結果和討論
疊加進樣模式下的純化放大
手性分離中通用的最佳做法是利用疊加進樣模式進行樣品進樣和餾分收集，這可實現效率最大化並降低生產成本。
zaihanyouyidingzazhidefuzatixizhong，zhipuyindaodexitongkeyijiandinghexuanzexingdeshoujiganxingqudemubiaohuahewu，bingzhengquedehulvebuxuyaozazhi。yiner，gaixitongduiyushouxinghuahewudeSFC純化，具有高效、適用範圍廣的特點，並成為手性藥物開發的常規主流工具。
我們對質譜引導的Prep100 SFCxitongjinxingleyidingdegaizao，yibianjianggaixitongyongyushouxinghuahewufenlichunhuashidadaoqizuidaxiaoyi，qizhongbaokuotianjialeyigezhuanyongjinyangqibinggaibianleshoujichuangbujuyirongnagengdaderongqi，congerkezhongfushoujiduiyingtideliufen。
層疊進樣/進樣器的啟用
Prep 100 SFC係統整合了一個沃特世疊加進樣模塊，用戶選擇“進樣類型”並輸入疊加進樣的總次數以及軟件程序中的其它相關參數，如圖1和圖2所示。以疊加進樣的模式，運行一個自定義的進樣序列，該進樣器可從單一樣品容器中抽取多份等量樣品。
未使用疊加進樣模式時，2767型樣品管理器能繼續按照“樣品列表”所定義的順序從樣品架上逐個進樣單一樣品。
圖3顯xian示shi了le對dui一yi種zhong雙shuang峰feng混hun合he物wu進jin行xing疊die加jia進jin樣yang後hou得de出chu的de典dian型xing色se譜pu圖tu。紫zi外wai和he質zhi譜pu對dui所suo需xu物wu質zhi的de檢jian測ce結jie果guo均jun是shi正zheng確que的de，從cong而er確que保bao了le通tong過guo紫zi外wai或huo質zhi譜pu觸chu發fa可ke進jin行xing可ke靠kao而er成cheng功gong的de餾liu分fen收shou集ji。在zai本ben例li中zhong，紫zi外wai信xin號hao用yong作zuo收shou集ji觸chu發fa；必要時也可使用質譜信號。
自定義用於單個樣品瓶的收集床布局
質譜引導的Prep 100 SFC係統使用2767型樣品管理器作為專用餾分收集器。在手性化合物純化中，由於餾分收集數為兩份（或者在某些情況下可能多達四份），因此需要用更大容器及重複式前後收集模式取代一對一模式下的常規類型試管架。
所以，2767型(xing)樣(yang)品(pin)管(guan)理(li)器(qi)可(ke)通(tong)過(guo)定(ding)義(yi)收(shou)集(ji)的(de)位(wei)置(zhi)及(ji)更(geng)大(da)容(rong)器(qi)而(er)進(jin)行(xing)定(ding)製(zhi)。從(cong)而(er)可(ke)對(dui)同(tong)一(yi)個(ge)對(dui)映(ying)體(ti)的(de)所(suo)有(you)疊(die)加(jia)進(jin)樣(yang)序(xu)列(lie)結(jie)果(guo)，通(tong)過(guo)重(zhong)複(fu)式(shi)的(de)前(qian)後(hou)收(shou)集(ji)方(fang)式(shi)，收(shou)集(ji)到(dao)相(xiang)同(tong)的(de)收(shou)集(ji)瓶(ping)中(zhong)。
如圖3所示，兩種對映體餾分分別被收集進1號瓶（粉紅色條帶）和2號瓶（綠色條帶）。這在2767型樣品管理器上以反複模式根據序列內的單一進樣管線而完成。這表明使用Masslynx軟件和Fractionlynx樣品管理器進行樣品收集的過程是成功的，並且滿足了依據對映異構體對的信號強度水平進行正確鑒定和收集的關鍵標準。
圖4所(suo)示(shi)，是(shi)對(dui)一(yi)個(ge)包(bao)含(han)無(wu)關(guan)雜(za)質(zhi)峰(feng)與(yu)對(dui)映(ying)異(yi)構(gou)體(ti)對(dui)的(de)體(ti)係(xi)進(jin)行(xing)分(fen)離(li)和(he)選(xuan)擇(ze)性(xing)收(shou)集(ji)的(de)實(shi)例(li)。如(ru)彩(cai)色(se)條(tiao)帶(dai)所(suo)示(shi)，通(tong)過(guo)目(mu)標(biao)化(hua)合(he)物(wu)的(de)質(zhi)譜(pu)引(yin)導(dao)，隻(zhi)有(you)兩(liang)個(ge)分(fen)離(li)開(kai)的(de)目(mu)標(biao)化(hua)合(he)物(wu)被(bei)收(shou)集(ji)，而(er)第(di)三(san)個(ge)峰(feng)（無關的雜質）沒有被收集。
MassLynx/FractionLynx AutoPurify?平台擁有眾多高級、適shi用yong於yu複fu雜za工gong作zuo流liu程cheng的de檢jian測ce和he收shou集ji算suan法fa，例li如ru，使shi用yong多duo種zhong檢jian測ce器qi信xin號hao進jin行xing觸chu發fa的de布bu爾er邏luo輯ji算suan法fa。如ru果guo樣yang品pin已yi足zu夠gou純chun淨jing，那na麼me用yong戶hu可ke選xuan擇ze使shi用yongUV/ PDA進行檢測；如果樣品包含相當數量的雜質，那麼用戶可選擇使用組合型信號和斜率算法以及特定的目標分子量，以確保得到更純的收集餾分。
MassLynx/FractionLynx AutoPurify平台擁有眾多高級、適shi用yong於yu複fu雜za工gong作zuo流liu程cheng的de檢jian測ce和he收shou集ji算suan法fa，例li如ru，使shi用yong多duo種zhong檢jian測ce器qi信xin號hao進jin行xing觸chu發fa的de布bu爾er邏luo輯ji算suan法fa。如ru果guo樣yang品pin已yi足zu夠gou純chun淨jing，那na麼me用yong戶hu可ke選xuan擇ze使shi用yongUV/ PDA進行檢測；如果樣品包含相當數量的雜質，那麼用戶可選擇使用組合型信號和斜率算法以及特定的目標分子量，以確保得到更純的收集餾分。
五、結論
已經證實質譜引導Prep 100 SFC係統在不同藥物的開發過程中具有高效、適用性強及用途廣的特點。本文所述的質譜引導Prep 100 SFC係統疊加進樣和收集的附加特點使其對手性分離具有更強的定製能力，從而可為純化實驗室的色譜分析師帶來效益，例如：
■ 多重、多功能檢測模式實現了更高的成功率；
■ 基於開放床式平台的相同疊加進樣和收集模式簡化了使用方法；
■ 能提供一個遵從行業和政府規定的更安全的實驗室環境。
