血清學反應是指:相應的抗原與抗體在體外一定條件下作用,可出現肉眼可見的沉澱、凝集現象。在食品微生物檢驗中,常用血清學反應來鑒定分離到的細菌,以最終確認檢測結果。
血清學反應的一般特點:
(1)抗原體的結合具有特異性,當有共同抗原體存在時,會出現交叉反應。
(2)抗原體的結合是分子表麵的結合,這種結合雖相當穩定,但是可逆的。
(3)抗原體的結合是按一定比例進行的,隻有比例適當時,才能出現可見反應。
(4)血xue清qing學xue反fan應ying大da體ti分fen為wei兩liang個ge階jie段duan進jin行xing,但dan其qi間jian無wu嚴yan格ge界jie限xian。第di一yi階jie段duan為wei抗kang原yuan體ti特te異yi性xing結jie合he階jie段duan,反fan應ying速su度du很hen快kuai,隻zhi需xu幾ji秒miao至zhi幾ji分fen鍾zhong反fan應ying即ji可ke完wan畢bi,但dan不bu出chu現xian肉rou眼yan可ke見jian現xian象xiang。第di二er階jie段duan為wei抗kang原yuan體ti反fan應ying的de可ke見jian階jie段duan,表biao現xian為wei凝ning集ji、沉澱、補體結合反應等。反應速度慢,需幾分、幾十分以至更長時間。而且,在第二階段反應中,電解質、PH、溫度等環境因素的變化,都直接影響血清學反應的結果。
習慣上將經典的血清學反應分三種類別:凝集反應、沉澱反應和補體結合反應。
1.凝集反應
顆粒性抗原(細菌、紅細胞等)與相應抗體結合,在電解質參與下所形成的肉眼可見的凝集現象,稱為凝集反應(Agglutination reaction)。其中的抗原稱為凝集原,抗體稱為凝集素。在該反應中,因為單位體積抗體量大,做定量實驗時,應稀釋抗體。
(1)直接凝集反應
顆粒性抗原與相應抗體直接結合所出現的反應,稱為直接凝集反應(Direct agglution reaction)。
a.玻片凝集法。是一種常規的定性試驗方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。常用於鑒定菌種、血(xue)型(xing)。如(ru)將(jiang)含(han)有(you)痢(li)疾(ji)杆(gan)菌(jun)抗(kang)體(ti)的(de)血(xue)清(qing)與(yu)待(dai)檢(jian)菌(jun)液(ye)各(ge)一(yi)滴(di),在(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)混(hun)勻(yun),數(shu)分(fen)種(zhong)後(hou)若(ruo)出(chu)現(xian)肉(rou)眼(yan)可(ke)見(jian)的(de)凝(ning)集(ji)塊(kuai),即(ji)陽(yang)性(xing)反(fan)應(ying),證(zheng)明(ming)該(gai)菌(jun)是(shi)痢(li)疾(ji)杆(gan)菌(jun)。此(ci)法(fa)快(kuai)速(su)、簡便,但不能進行定量測定。
b.試shi管guan凝ning集ji法fa。是shi一yi種zhong定ding量liang試shi驗yan方fang法fa。多duo用yong已yi知zhi抗kang原yuan來lai檢jian測ce血xue清qing中zhong有you無wu相xiang應ying抗kang體ti及ji其qi含han量liang。常chang用yong於yu協xie助zhu診zhen斷duan某mou些xie傳chuan染ran病bing及ji進jin行xing流liu行xing病bing學xue調tiao查zha。如ru肥fei達da氏shi反fan應ying就jiu是shi診zhen斷duan傷shang寒han、付傷寒的試管凝集試驗。因為要測定抗體的含量,故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度,然後加入等量抗原,37℃或56℃,2~4小時觀察,血清最高稀釋度仍有明顯凝集現象的,為該抗血清的凝集效價。
(2)間接凝集反應
將可溶性抗原(抗體)先吸附在一種與免疫無關的,顆粒狀微球表麵,然後與相應抗體(抗原)作用,在有電解質存在的條件下,即可發生凝集,稱為間接凝集反應(Indirect agglutination)。由於載體增大了可溶性抗原的反應麵積。當載體上有少量抗原與抗體結合。就出現肉眼可見的反應,敏感性很高。
2.沉澱反應
可溶性抗原與相應抗體結合,在有適量電解質存在下,經過一定時間,形成肉眼可見的沉澱物,稱為沉澱反應(Precipitation)。反(fan)應(ying)中(zhong)的(de)抗(kang)原(yuan)稱(cheng)為(wei)沉(chen)澱(dian)原(yuan),抗(kang)體(ti)為(wei)沉(chen)澱(dian)素(su)。由(you)於(yu)在(zai)單(dan)位(wei)體(ti)積(ji)內(nei)抗(kang)原(yuan)量(liang)大(da),為(wei)了(le)不(bu)使(shi)抗(kang)原(yuan)過(guo)剩(sheng),故(gu)應(ying)稀(xi)釋(shi)抗(kang)原(yuan),並(bing)以(yi)抗(kang)原(yuan)的(de)稀(xi)釋(shi)度(du)作(zuo)為(wei)沉(chen)澱(dian)反(fan)應(ying)的(de)效(xiao)價(jia)。
(1)環狀沉澱反應:是(shi)一(yi)種(zhong)定(ding)性(xing)試(shi)驗(yan)方(fang)法(fa),可(ke)用(yong)已(yi)知(zhi)抗(kang)體(ti)檢(jian)測(ce)未(wei)知(zhi)抗(kang)原(yuan)。將(jiang)已(yi)知(zhi)抗(kang)體(ti)注(zhu)入(ru)特(te)製(zhi)小(xiao)試(shi)管(guan)中(zhong),然(ran)後(hou)沿(yan)管(guan)壁(bi)徐(xu)徐(xu)加(jia)入(ru)等(deng)量(liang)抗(kang)原(yuan),如(ru)抗(kang)原(yuan)與(yu)抗(kang)體(ti)對(dui)應(ying),則(ze)在(zai)兩(liang)液(ye)界(jie)麵(mian)出(chu)現(xian)白(bai)色(se)的(de)沉(chen)澱(dian)圓(yuan)環(huan)。
(2)絮狀沉澱反應:將已知抗原與抗體在試管(如凹玻片)內混勻,如抗原抗體對應,而又二者比例適當時,會出現肉眼可見的絮狀沉澱,此為陽性反應。
(3)瓊脂擴散試驗:利(li)用(yong)可(ke)溶(rong)性(xing)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)在(zai)半(ban)固(gu)體(ti)瓊(qiong)脂(zhi)內(nei)擴(kuo)散(san),若(ruo)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)對(dui)應(ying),且(qie)二(er)者(zhe)比(bi)例(li)合(he)適(shi),在(zai)其(qi)擴(kuo)散(san)的(de)某(mou)一(yi)部(bu)分(fen)就(jiu)會(hui)出(chu)現(xian)白(bai)色(se)的(de)沉(chen)澱(dian)線(xian)。每(mei)對(dui)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)可(ke)形(xing)成(cheng)一(yi)條(tiao)沉(chen)澱(dian)線(xian)。有(you)幾(ji)對(dui)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti),就(jiu)可(ke)分(fen)別(bie)形(xing)成(cheng)幾(ji)條(tiao)沉(chen)澱(dian)線(xian)。瓊(qiong)脂(zhi)擴(kuo)散(san)可(ke)分(fen)為(wei)單(dan)向(xiang)擴(kuo)散(san)和(he)雙(shuang)向(xiang)擴(kuo)散(san)兩(liang)種(zhong)類(lei)型(xing)。單(dan)向(xiang)擴(kuo)散(san)是(shi)一(yi)種(zhong)定(ding)量(liang)試(shi)驗(yan)。可(ke)用(yong)於(yu)免(mian)疫(yi)蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)的(de)測(ce)定(ding)。而(er)雙(shuang)向(xiang)擴(kuo)散(san)多(duo)用(yong)於(yu)定(ding)性(xing)試(shi)驗(yan)。由(you)於(yu)方(fang)法(fa)簡(jian)便(bian)易(yi)行(xing),常(chang)用(yong)於(yu)測(ce)定(ding)分(fen)析(xi)和(he)鑒(jian)定(ding)複(fu)雜(za)的(de)抗(kang)原(yuan)成(cheng)分(fen)。 3、補體結合反應
補體結合反應(Complement fixation reaction)是shi在zai補bu體ti參can與yu下xia,以yi綿mian羊yang紅hong細xi胞bao和he溶rong血xue素su作zuo為wei指zhi示shi係xi統tong的de抗kang原yuan抗kang體ti反fan應ying。補bu體ti無wu特te異yi性xing,能neng與yu任ren何he一yi組zu抗kang原yuan抗kang體ti複fu合he物wu結jie合he而er引yin起qi反fan應ying。如ru果guo補bu體ti與yu綿mian羊yang紅hong細xi胞bao、溶血素的複合物結合,就會出現溶血現象,如果與細菌及相應抗體複合物結合,就會出現溶菌現象。因此,整個試驗需要有補體、待檢係統(已知抗體或抗原、未知抗原或抗體)及指示係統(綿羊細胞和溶血素)五wu種zhong成cheng份fen參can加jia。其qi試shi驗yan原yuan理li是shi補bu體ti不bu單dan獨du和he抗kang原yuan或huo抗kang體ti結jie合he。如ru果guo出chu現xian溶rong菌jun,是shi補bu體ti與yu待dai檢jian係xi統tong結jie合he的de結jie果guo,說shuo明ming抗kang原yuan抗kang體ti是shi相xiang對dui應ying的de,如ru果guo出chu現xian溶rong血xue,說shuo明ming抗kang原yuan抗kang體ti不bu相xiang對dui應ying。此ci反fan應ying操cao作zuo複fu雜za,敏min感gan性xing高gao,特te異yi性xing強qiang,能neng測ce出chu少shao量liang抗kang原yuan和he抗kang體ti,所suo以yi應ying用yong範fan圍wei較jiao廣guang。
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