微(wei)生(sheng)物(wu)長(chang)期(qi)受(shou)到(dao)外(wai)界(jie)的(de)影(ying)響(xiang)，遺(yi)傳(chuan)性(xing)狀(zhuang)必(bi)然(ran)發(fa)生(sheng)某(mou)些(xie)變(bian)異(yi)。正(zheng)是(shi)由(you)於(yu)變(bian)異(yi)的(de)存(cun)在(zai)才(cai)使(shi)得(de)生(sheng)物(wu)向(xiang)前(qian)進(jin)化(hua)。然(ran)而(er)由(you)於(yu)突(tu)變(bian)的(de)存(cun)在(zai)，菌(jun)種(zhong)在(zai)培(pei)養(yang)或(huo)保(bao)藏(zang)過(guo)程(cheng)中(zhong)，可(ke)能(neng)會(hui)出(chu)現(xian)某(mou)些(xie)優(you)良(liang)生(sheng)產(chan)性(xing)狀(zhuang)的(de)劣(lie)化(hua)、遺傳標記丟失、典型特征改變等現象，稱為菌種衰退。比如蘇雲金芽孢杆菌由於菌種衰退，導致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較小；保藏的沙門氏菌鞭毛抗原丟失，導致H多價血清不凝固等。
 

1. 菌種衰退原因

菌種衰退的根本原因是有關基因的負突變。如果控製產量的基因發生負突變
，則表現為產量下降；如果控製孢子生成的基因發生負突變，則產生孢子的能力下降。菌種在移種傳代過程中會發生自發突變。雖然自發突變的幾率很低(一般為10-6~10-9)，youqishiduiyumouyitedingjiyinlaishuo，tubianpinlvgengdi。danshiyouyuweishengwujuyoujigaodedaixiefanzhinengli
，suizhechuandaicishuzengjia，shuaituixibaodeshumujiuhuibuduanzengjia
，zaishuliangshangzhujianzhanyoushi
，zuizhongchengweiyizhushuaituiledejunzhu。ciwai
，junzhongshuaituihaiyouyixiajizhongyuanyin：

1）表型延遲造成菌種衰退

表型延遲現象也會造成菌種衰退。如，在誘變育種過程中，經常會發現某菌株初篩時產量較高，進行複篩時產量卻下降了。

2）質粒脫落導致菌種衰退

質粒脫落導致菌種衰退的情況在抗生素生產中較多，不少抗生素的合成是受質粒控製的。當菌株細胞由於自發突變或外界條件影響(如高溫)，致使控製產量的質粒脫落或者核內DNA和質粒複製不一致，即DNA複fu製zhi速su度du超chao過guo質zhi粒li，經jing多duo次ci傳chuan代dai後hou，某mou些xie細xi胞bao中zhong就jiu不bu具ju有you對dui產chan量liang起qi決jue定ding作zuo用yong的de質zhi粒li，這zhe類lei細xi胞bao數shu量liang不bu斷duan提ti高gao達da到dao優you勢shi，則ze菌jun種zhong表biao現xian為wei衰shuai退tui。

3）連續傳代

連續傳代是加速菌種衰退的一個重要原因。一方麵

，傳代次數越多
，發生自發突變(尤其是負突變)的幾率越高
；另一方麵，傳代次數越多，群體中個別的衰退型細胞數量增加並占據優勢越快，致使群體表型出現衰退。

4）不適宜的培養和保藏條件

不適宜的培養和保藏條件是加速菌種衰退的另一個重要原因。不良的培養條件如營養成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等和保藏條件如營養、含水量、溫度、氧氣等，不僅會誘發衰退型細胞的出現，還會促進衰退細胞迅速繁殖
，在數量上大大超過正常細胞，造成菌種衰退。

2. 防止菌種衰退措施

采(cai)用(yong)已(yi)衰(shuai)退(tui)菌(jun)種(zhong)進(jin)行(xing)生(sheng)產(chan)會(hui)影(ying)響(xiang)生(sheng)產(chan)效(xiao)率(lv)，而(er)把(ba)已(yi)衰(shuai)退(tui)菌(jun)種(zhong)作(zuo)為(wei)陽(yang)性(xing)菌(jun)株(zhu)進(jin)行(xing)檢(jian)驗(yan)，則(ze)會(hui)影(ying)響(xiang)檢(jian)驗(yan)正(zheng)確(que)率(lv)。既(ji)然(ran)變(bian)異(yi)是(shi)不(bu)可(ke)避(bi)免(mian)的(de)，那(na)麼(me)我(wo)們(men)應(ying)該(gai)如(ru)果(guo)避(bi)免(mian)菌(jun)種(zhong)衰(shuai)退(tui)呢(ne)？

1）控製傳代次數

jinliangbimianbubiyaodeyizhonghechuandai，babiyaodechuandaijianshaodaozuidideshuipingyijianshaotubianjilv。chuandaicishuyueduo，chanshengtubiandejilvjiuyueda，junzhongfashengshuaituidejihuijiuyuegao。zaishiyanshijianyanhuozheshishengchanshijizhong，yingyangekongzhichuandaicishu。zhongguoyaodiandangzhongguiding，peiyangjilingmindujianzhasuoyongdejunzhuchuandaicishubudechaoguo5代，以防止菌株因傳代次數過多引起衰退影響檢驗。

2）利用不同類型細胞進行接種傳代

放線菌，黴菌用菌絲進行移種比分生孢子容易衰退
，因菌絲是對核且有異核存在，所以移種黴菌適宜采用孢子。

3）良好的培養條件

不良的培養條件會衰退細胞的出現
，因此采用適宜的培養基進行菌種培養，以減少衰退幾率

4）采用有效的菌種保藏方法

根據保存時間的長短
，選擇適宜的保存方法。

傳代培養法：複蘇後的第一代放於4℃冰箱或室溫保存，定期傳代培養。保藏時間依微生物種類而定。如，芽孢、黴菌、酵母菌保存6個月轉一次，普通細菌1個月轉一次，假單胞菌2周轉一次。

甘油凍存法：將複活後經過性能確認的菌株新鮮培養物（一般是第二代菌株），用0.85%的滅菌生理鹽水（約1-2ml）洗斜麵菌苔成菌懸液；將上述菌懸液吸取適量於滅菌管（凍存管）中（如
，滅菌管容量為5ml，則取1.5ml菌液），加入等體積的40%滅菌甘油，混勻
，密封。保藏溫度為-20℃，一般可保存1-2年。

瓷珠保存管保存：菌株保藏管內含特製的小珠（20-25顆）和特殊溶液，隻需將培養好的菌株接入溶液中
，搖勻成菌懸液
，細胞即吸附於小珠上，然後吸出溶液，將保藏管置-70℃可保存5年

，置-20℃可保存2-3年。

---想了解更多資訊，微信搜索“藥物微生物檢驗”，關注公眾號！---

---小編微信： 李老師 ---