01 菌種代碼的意義
國內常見微生物檢驗所用的菌種代號是：
CMCC（F）或 CMCC（B）

CMCC ―― 中國醫學菌種保藏中心

B ―― 代表細菌

F ――代表真菌
大腸杆菌：CMCC (B) 44102；
乙型副傷寒沙門杆菌：CMCC (B) 50094；
銅綠假單胞菌：CMCC (B)10104；
金黃色葡萄球菌：CMCC (B)26003
；
生孢梭菌：CMCC(B)64941；
白色念珠菌：CMCC(F)98001。

02 菌種的複蘇
按照菌種的使用說明將複蘇液在超淨工作台或生物安全櫃內進行複蘇。

03 常用菌種保藏方法
瓊脂斜麵低溫保存法
（1）方法：將經常使用的菌種的典型菌落接種在斜麵（某些特殊菌種可用液體培養基）上(shang)
，按(an)規(gui)定(ding)的(de)溫(wen)度(du)和(he)時(shi)間(jian)培(pei)養(yang)，待(dai)充(chong)分(fen)生(sheng)長(chang)後(hou)，把(ba)培(pei)養(yang)好(hao)的(de)新(xin)鮮(xian)菌(jun)種(zhong)用(yong)牛(niu)皮(pi)紙(zhi)包(bao)好(hao)，為(wei)減(jian)緩(huan)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)水(shui)分(fen)蒸(zheng)發(fa)
，延(yan)長(chang)保(bao)藏(zang)時(shi)間(jian)，可(ke)將(jiang)菌(jun)種(zhong)保(bao)藏(zang)管(guan)的(de)棉(mian)花(hua)塞(sai)換(huan)成(cheng)橡(xiang)膠(jiao)塞(sai)。放(fang)在(zai)4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月傳代一次。若用半固體高層培養基穿刺培養
，一般可保藏半年至一年。
（2）適用範圍：細菌、酵母菌、黴菌保藏。
（3）特點：優點是簡便，易於推廣；一般不需要另選擇保藏用培養基；對大多數微生物都適用

；缺點是保藏期太短

；傳代次數多，易發生變異及汙染。
（4）注意事項：
a.保藏的菌種應是生命活力旺盛的新鮮培養物，至少應是第三代的培養物。
b.保藏時，破傷風杆菌可用庖肉培養基
；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養基。必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度
、濕度以及菌種管的棉塞是否鬆動或生黴，如有異常應及時處理。
c.每次移植後，應與原菌種的編號
、名稱逐一核對，確證培養基特征和純度無誤後再繼續保藏。
d.保藏菌種的培養基應無糖
，其他菌類含糖小於 2 %為宜，以免產酸過多，影響菌種存活。
e.銅綠假單胞菌在冰箱中易發生菌體自溶而死亡，不宜用本法保存。
液體石蠟保存法
（1）方法：將菌種接種於斜麵或穿刺於0.3~0.5 %瓊脂半固體高層培養基中，培養好備用。取化學純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上紙
，121℃高壓滅菌30min

，取出置37℃溫箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或幹燥器內除去液體石蠟中的水分。

將上述液體石蠟加入培養好的菌種試管內
，液體石蠟液麵以高出培養基最上端1cm為宜
，將試管直立
，放入4℃冰箱中保藏。

（2）適用範圍：適用於保藏部分黴菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。

（3）特點：本方法簡便易行
，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。

（4）注意事項： 

a.保藏時
，用新鮮培養物接種，應檢查純度和特征後，方可進行保藏。

b.使(shi)用(yong)菌(jun)種(zhong)時(shi)
，先(xian)將(jiang)菌(jun)種(zhong)管(guan)傾(qing)斜(xie)使(shi)液(ye)體(ti)石(shi)蠟(la)流(liu)至(zhi)一(yi)邊(bian)，再(zai)用(yong)接(jie)種(zhong)針(zhen)挑(tiao)取(qu)培(pei)養(yang)物(wu)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)鮮(xian)斜(xie)麵(mian)上(shang)培(pei)養(yang)，待(dai)長(chang)出(chu)新(xin)培(pei)養(yang)物(wu)後(hou)，再(zai)移(yi)種(zhong)一(yi)次(ci)到(dao)新(xin)斜(xie)麵(mian)上(shang)即(ji)可(ke)使(shi)用(yong)。

c.將沾有少量液體石蠟的接種針浸於95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起汙染.

d.液體石蠟在菌種管中高出培養基的高度要嚴格控製，如太多，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少

，斜麵容易幹燥，將縮短保藏期。一般以高出斜麵1cm為宜。

e.製備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多
，否則分裝到菌種培養基中易造成汙染。

 磁珠保存法
將菌液浸入素燒磁珠(或多孔玻璃珠)後再進行幹燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的矽膠(或無水CaSO₄)
，上鋪玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，經幹熱滅菌後，接入菌懸液，最後冷藏、室溫保藏或減壓幹燥後密封保藏。

本法對酵母菌很有效，特別適用於根瘤菌，可保存長達兩年半時間。

磁珠保存時間更長，使用方便，大大減輕操作人員的工作。

04常用菌種保藏方法
方法一：斜麵傳代

冰箱取出的菌種斜麵
，應在室溫放置約30分鍾
，待溫度平衡後再移入超淨工作台或生物安全櫃。

點燃酒精燈（滅菌器），用左手握住菌種斜麵，將管口靠進火焰旁
，右手拿接種棒後端，將接種環燒紅30秒，隨後將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼
，往返通過3次。左手將管口在火焰上旋轉燒灼，右手用無名指、xiaozhijizhangbujiazhushiguansai，bokaishiguansai，jiangjiezhonghuanshenruguanneixianzaijinbideqiongzhixiemianshangkaoyixia
，shaolengquezaiyizhijuntaishang


，guaqushaoliangjuntai，suijiquchujiezhongbang，bingjiangjunzhongguankouyizhihuoyanpang。

堵上試管塞
，左手將菌種管放下，取營養瓊脂斜麵1支(zhi)
，照(zhao)上(shang)述(shu)操(cao)作(zuo)打(da)開(kai)試(shi)管(guan)塞(sai)，將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)伸(shen)入(ru)管(guan)內(nei)至(zhi)瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)麵(mian)的(de)低(di)部(bu)，由(you)底(di)向(xiang)上(shang)，將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)輕(qing)貼(tie)斜(xie)麵(mian)的(de)表(biao)麵(mian)曲(qu)折(zhe)移(yi)動(dong)，使(shi)細(xi)菌(jun)劃(hua)在(zai)斜(xie)麵(mian)的(de)表(biao)麵(mian)上(shang)。

取出接種棒，在火焰旁將試管塞堵上
，然後將接種棒在火焰上燒灼滅菌。

將已接種完的斜麵置35~37℃培養22~24小時，黴菌管一般置20~25℃黴菌培養箱內培養7日。取出後放人冰箱保存，一般 3個月轉種一次。

 方法二：斜麵-營養肉湯-分離平板-斜麵

用接種環取上述斜麵菌苔少許接種置營養肉湯中(5ml/支，已滅菌)

，置35~37℃培養18~24小時後
，再用接種環取培養好的營養肉湯菌懸液，接種於分離平板
，置35~37℃培養18~24小時，用接種針選典型菌落劃線於營養瓊脂斜麵，置35~37℃培養18~24小時。一般同時接種幾支管
，其中一支用於以後菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養基中，其它用做工作菌種。

常用分離平板：

大腸埃希菌――EMB瓊脂平板；

銅綠假單胞菌――溴化十六烷三甲銨瓊脂培養基；

金黃色葡萄球菌――甘露醇氯化鈉瓊脂培養基。

 05 菌種保管
菌種保管應有專人負責

，雙人雙鎖
，確保菌種安全。
菌種領用、傳代、保存都要有記錄，包括名稱、入庫、領用、傳代日期、鑒定者、主要鑒定性能及滅活或銷毀情況。