希望有助於微生物檢測工作的小夥伴們更好地開展工作。
一、什麼是培養基?
培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配製而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。
二、培養基的購置
從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養基的供應企業進行評價後選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體係的認證是較為客觀的評價指標。
要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。
三、培養基的驗收
購買的培養基到貨後,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨後都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求後方可投入使用。
四、培養基的儲存
幹粉培養基應保存在陰涼幹燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的保存期限以廠家提供為準,開瓶後的幹粉培養基易吸濕,應注意防潮並盡快用完。
應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性複查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
五、培養基的製備
1.培養基用水
培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙,避免交叉汙染而影響檢驗結果;幹粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
3.複水
複水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大於複水後培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鍾;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對於少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。
燒(shao)糊(hu)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)被(bei)破(po)壞(huai),並(bing)可(ke)產(chan)生(sheng)有(you)毒(du)物(wu)質(zhi),如(ru)發(fa)現(xian)焦(jiao)化(hua),或(huo)未(wei)溶(rong)解(jie)均(jun)勻(yun)前(qian)培(pei)養(yang)基(ji)有(you)溢(yi)出(chu),該(gai)培(pei)養(yang)基(ji)即(ji)不(bu)能(neng)使(shi)用(yong),應(ying)重(zhong)新(xin)製(zhi)備(bei)。對(dui)於(yu)瓊(qiong)脂(zhi)類(lei)培(pei)養(yang)基(ji)進(jin)行(xing)再(zai)融(rong)化(hua)時(shi)應(ying)使(shi)用(yong)沸(fei)水(shui)浴(yu)或(huo)流(liu)動(dong)蒸(zheng)汽(qi)進(jin)行(xing)加(jia)熱(re),最(zui)多(duo)隻(zhi)能(neng)加(jia)熱(re)兩(liang)次(ci),第(di)二(er)次(ci)再(zai)融(rong)化(hua)後(hou)仍(reng)未(wei)用(yong)完(wan)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)棄(qi)去(qu)。
4.滅菌
一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃、15min,含han糖tang或huo特te殊shu培pei養yang基ji,按an照zhao國guo家jia標biao準zhun或huo生sheng產chan商shang提ti供gong的de說shuo明ming滅mie菌jun。已yi配pei製zhi好hao的de培pei養yang基ji必bi須xu立li即ji滅mie菌jun,避bi免mian微wei生sheng物wu生sheng長chang繁fan殖zhi而er消xiao耗hao養yang分fen,改gai變bian培pei養yang基ji的de酸suan堿jian度du。
高(gao)溫(wen)可(ke)破(po)壞(huai)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen),還(hai)會(hui)使(shi)瓊(qiong)脂(zhi)的(de)凝(ning)膠(jiao)強(qiang)度(du)下(xia)降(jiang),因(yin)此(ci)必(bi)須(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)製(zhi)滅(mie)菌(jun)溫(wen)度(du)和(he)時(shi)間(jian),並(bing)且(qie)不(bu)可(ke)重(zhong)複(fu)滅(mie)菌(jun)。高(gao)壓(ya)蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌(jun)鍋(guo)的(de)壓(ya)力(li)表(biao)等(deng)要(yao)定(ding)期(qi)進(jin)行(xing)檢(jian)定(ding),並(bing)定(ding)期(qi)采(cai)用(yong)生(sheng)物(wu)指(zhi)示(shi)菌(jun)法(fa)或(huo)化(hua)學(xue)變(bian)色(se)紙(zhi)片(pian)對(dui)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)進(jin)行(xing)驗(yan)證(zheng)。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH 值,即培養基使用前的pH,並應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表麵測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/L Na0H或1mol/L HCL調整,注意不可反複調pH,否則會影響培養基的滲透壓。
6.配製好的培養基保存
滅菌以後培養基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。
所配製的培養基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完,應於冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。
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