在土壤、水
、空氣或人及動、植(zhi)物(wu)體(ti)中(zhong)，不(bu)同(tong)種(zhong)類(lei)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)都(dou)是(shi)混(hun)雜(za)生(sheng)活(huo)在(zai)一(yi)起(qi)，當(dang)我(wo)們(men)希(xi)望(wang)獲(huo)得(de)某(mou)一(yi)種(zhong)微(wei)生(sheng)物(wu)時(shi)
，就(jiu)必(bi)須(xu)從(cong)混(hun)雜(za)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)類(lei)群(qun)中(zhong)分(fen)離(li)它(ta)，以(yi)得(de)到(dao)隻(zhi)含(han)有(you)這(zhe)一(yi)種(zhong)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)純(chun)培(pei)養(yang)，這(zhe)種(zhong)獲(huo)得(de)純(chun)培(pei)養(yang)的(de)方(fang)法(fa)稱(cheng)為(wei)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)分(fen)離(li)與(yu)純(chun)化(hua)。

為了獲得某種微生物的純培養
，一般是根據該微生物對營養、酸堿度、氧(yang)等(deng)條(tiao)件(jian)要(yao)求(qiu)不(bu)同(tong)，而(er)供(gong)給(gei)它(ta)適(shi)宜(yi)的(de)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)，或(huo)加(jia)入(ru)某(mou)種(zhong)抑(yi)製(zhi)劑(ji)造(zao)成(cheng)隻(zhi)利(li)於(yu)此(ci)菌(jun)生(sheng)長(chang)，而(er)抑(yi)製(zhi)其(qi)他(ta)菌(jun)生(sheng)長(chang)的(de)環(huan)境(jing)，從(cong)而(er)淘(tao)汰(tai)其(qi)他(ta)一(yi)些(xie)不(bu)需(xu)要(yao)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)，再(zai)用(yong)稀(xi)釋(shi)塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban)法(fa)或(huo)稀(xi)釋(shi)混(hun)合(he)平(ping)板(ban)法(fa)或(huo)平(ping)板(ban)劃(hua)線(xian)分(fen)離(li)法(fa)等(deng)分(fen)離(li)
、純化該微生物
，直至得到純菌株。

土tu壤rang是shi微wei生sheng物wu生sheng活huo的de大da本ben營ying
，在zai這zhe裏li生sheng活huo的de微wei生sheng物wu無wu論lun是shi數shu量liang和he種zhong類lei都dou是shi極ji其qi多duo樣yang的de
，因yin此ci
，土tu壤rang是shi我wo們men開kai發fa利li用yong微wei生sheng物wu資zi源yuan的de重zhong要yao基ji地di，可ke以yi從cong其qi中zhong分fen離li、純化到許多有用的菌株。

主要試劑

高氏1號瓊脂培養基，肉膏蛋白腖瓊脂培養基
，馬丁氏瓊脂培養基，10％酚，無菌培養皿，鏈黴素，土樣等。

主要設備

盛9ml無菌水的試管，盛90ml無菌水並帶有玻璃珠的三角燒瓶，無菌玻璃塗棒，無菌吸管，接種環等。

實驗步驟

1. 稀釋塗布平板法

   1) 倒平板

將肉膏蛋白腖培養基
、高氏1號瓊脂培養基
、馬丁氏瓊脂培養基溶化，待冷至55—60℃時，向高氏1號瓊脂培養基中加入10％酚數滴，向馬丁氏培養基中加入鏈黴素溶液，使每毫升培養基中含鏈黴素30μg。然ran後hou分fen別bie倒dao平ping板ban
，每mei種zhong培pei養yang基ji倒dao三san皿min，其qi方fang法fa是shi右you手shou持chi盛sheng培pei養yang基ji的de試shi管guan或huo三san角jiao燒shao瓶ping，置zhi火huo焰yan旁pang邊bian
，左zuo手shou拿na平ping皿min並bing鬆song動dong試shi管guan塞sai或huo瓶ping塞sai，用yong手shou掌zhang邊bian緣yuan和he小xiao指zhi
、無名指夾住拔出，如果試管內或三角燒瓶內的培養基一次可用完
，則管塞或瓶塞不必夾在手指中。試管（瓶)口在火焰上滅菌，然後左手將培養皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速倒入培養基約15ml，加jia蓋gai後hou輕qing輕qing搖yao動dong培pei養yang皿min，使shi培pei養yang基ji均jun勻yun分fen布bu，平ping置zhi於yu桌zhuo麵mian上shang，待dai凝ning後hou即ji成cheng平ping板ban。也ye可ke將jiang平ping皿min放fang在zai火huo焰yan附fu近jin的de桌zhuo麵mian上shang
，用yong左zuo手shou的de食shi指zhi和he中zhong指zhi夾jia住zhu管guan塞sai並bing打da開kai培pei養yang皿min，再zai注zhu入ru培pei養yang基ji，搖yao勻yun後hou製zhi成cheng平ping板ban。最zui好hao是shi將jiang平ping板ban放fang室shi溫wen2—3天
，或 37℃培養24小時
，檢查無菌落及皿蓋無冷凝水後再使用。

   2) 製備

土壤稀釋液稱取土樣10g，放入盛90ml無菌水並帶有玻璃珠的三角燒瓶中
，振搖約20分鍾
，使土樣與水充分混合
，將菌分散。用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液注入盛有9ml無菌水的試管中，吹吸三次
，使充分混勻。然後再用一支1ml無菌吸管從此試管中吸取1ml注入另一盛有9ml無菌水的試管中，以此類推製成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6各種稀釋度的土壤溶液。

   3) 塗布

將上述每種培養基的三個平板底麵分別用記號筆寫上10-4
、10-5和10-6三種稀釋度
，然後用三支1ml無菌吸管分別由10-4、10-5和10-6三管土壤稀釋液中各吸取0.2ml對號放入已寫好稀釋度的平板中
，用無菌玻璃塗棒在培養基表麵輕輕地塗布均勻。

   4) 培養

將高氏1號培養基平板和馬丁氏培養基平板倒置於28℃溫室中培養3—5日，肉膏蛋白腖平板倒置於37℃溫室中培養2—3日。　

   5) 挑菌

將培養後長出的單個菌落分別挑取接種到上述三種培養基的斜麵上，分別置28℃和37℃溫wen室shi中zhong培pei養yang，待dai菌jun苔tai長chang出chu後hou，檢jian查zha菌jun苔tai是shi否fou單dan純chun，也ye可ke用yong顯xian微wei鏡jing塗tu片pian染ran色se檢jian查zha是shi否fou是shi單dan一yi的de微wei生sheng物wu，若ruo有you其qi他ta雜za菌jun混hun雜za，就jiu要yao再zai一yi次ci進jin行xing分fen離li

、純化，直到獲得純培養。

2. 稀釋混合平板法

此法與稀釋塗布平板法基本相同
，無菌操作也一樣，所不同的是先分別吸取0.5ml 10-4、10-5
、10-6稀釋度的土壤懸液對號放入平皿，然後再倒入溶化後冷卻到45℃左右的培養基，邊倒入邊搖勻
，使樣品中的微生物與培養基混合均勻，待冷凝成平板後，分別倒置於28℃和37℃溫室中培養後，再挑取單個菌落，直至獲得純培養。

3. 平板劃線分離法

   1) 按稀釋塗布平板法倒平板，並用記號筆標明培養基名稱。

   2) 劃線在近火焰處，左手拿皿底
，右手拿接種環
，挑取上述10-1deturangxuanyeyihuanzaipingbanshanghuaxian。huaxiandefangfahenduo
，danwulunnazhongfangfahuaxian，qimudedoushitongguohuaxianjiangyangpinzaipingbanshangjinxingxishi，shixingchengdangejunluo。changyongdehuaxianfangfayouxialieerzhong：

      a. 用接種環以無菌操作挑取土壤懸液一環，先在平板培養基的一邊作第一次平行劃線3—4條，再轉動培養皿約70°角(jiao)，並(bing)將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)上(shang)剩(sheng)餘(yu)物(wu)燒(shao)掉(diao)，待(dai)冷(leng)卻(que)後(hou)通(tong)過(guo)第(di)一(yi)次(ci)劃(hua)線(xian)部(bu)分(fen)作(zuo)第(di)二(er)次(ci)平(ping)行(xing)劃(hua)線(xian)，再(zai)用(yong)同(tong)法(fa)通(tong)過(guo)第(di)二(er)次(ci)平(ping)行(xing)劃(hua)線(xian)部(bu)分(fen)作(zuo)第(di)三(san)次(ci)平(ping)行(xing)劃(hua)線(xian)和(he)通(tong)過(guo)第(di)三(san)次(ci)平(ping)行(xing)劃(hua)線(xian)部(bu)分(fen)作(zuo)第(di)四(si)次(ci)平(ping)行(xing)劃(hua)線(xian)。劃(hua)線(xian)完(wan)畢(bi)後(hou)，蓋(gai)上(shang)皿(min)蓋(gai)，倒(dao)置(zhi)於(yu)溫(wen)室(shi)培(pei)養(yang)。

      b. 將挑取有樣品的接種環在平板培養基上作連續劃線。劃線完畢後，蓋上皿蓋
，倒置溫室培養。

   3) 挑菌同稀釋塗布平板法
，一直到菌分純為止。