1952年,Nomarski在相差顯微鏡原理的基礎上發明了微分幹涉差顯微鏡(differential interference contrast microscope)。DIC顯微鏡又稱Nomarski相差顯微鏡(Nomarki contrast microscope),其優點是能顯示結構的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比,其標本可略厚一點,折射率差別更大,故影像的立體感更強。
DIC顯微鏡的物理原理完全不同於相差顯微鏡,技術設計要複雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光係統的前麵,使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了石英Wollaston棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二(er)者(zhe)成(cheng)一(yi)小(xiao)夾(jia)角(jiao)。聚(ju)光(guang)器(qi)將(jiang)兩(liang)束(shu)光(guang)調(tiao)整(zheng)成(cheng)與(yu)顯(xian)微(wei)鏡(jing)光(guang)軸(zhou)平(ping)行(xing)的(de)方(fang)向(xiang)。最(zui)初(chu)兩(liang)束(shu)光(guang)相(xiang)位(wei)一(yi)致(zhi),在(zai)穿(chuan)過(guo)標(biao)本(ben)相(xiang)鄰(lin)的(de)區(qu)域(yu)後(hou),由(you)於(yu)標(biao)本(ben)的(de)厚(hou)度(du)和(he)折(zhe)射(she)率(lv)不(bu)同(tong),引(yin)起(qi)了(le)兩(liang)束(shu)光(guang)發(fa)生(sheng)了(le)光(guang)程(cheng)差(cha)。在(zai)物(wu)鏡(jing)的(de)後(hou)焦(jiao)麵(mian)處(chu)安(an)裝(zhuang)了(le)第(di)二(er)個(ge)Wollaston棱鏡?碊IC滑行器,它把兩束光波合並成一束。這時兩束光的偏振麵(x和y)仍然存在。最後光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振麵的兩束光,從而使二者發生幹涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;光guang程cheng差cha值zhi等deng於yu波bo長chang一yi半ban時shi,穿chuan過guo的de光guang達da到dao最zui大da值zhi。於yu是shi在zai灰hui色se的de背bei景jing上shang,標biao本ben結jie構gou呈cheng現xian出chu亮liang暗an差cha。為wei了le使shi影ying像xiang的de反fan差cha達da到dao最zui佳jia狀zhuang態tai,可ke通tong過guo調tiao節jieDIC滑行器的縱行微調來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑hua行xing器qi可ke使shi標biao本ben的de細xi微wei結jie構gou呈cheng現xian出chu正zheng或huo負fu的de投tou影ying形xing象xiang,通tong常chang是shi一yi側ce亮liang,而er另ling一yi側ce暗an,這zhe便bian造zao成cheng了le標biao本ben的de人ren為wei三san維wei立li體ti感gan,類lei似si大da理li石shi上shang的de浮fu雕diao。
DIC顯微鏡使細胞的結構,特別是一些較大的細胞器,如核、線粒體等,立體感特別強,適合於顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進行。
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