準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)對(dui)開(kai)展(zhan)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)異(yi)常(chang)重(zhong)要(yao)，工(gong)作(zuo)量(liang)也(ye)較(jiao)大(da)
，應(ying)給(gei)予(yu)足(zu)夠(gou)的(de)重(zhong)視(shi)

，推(tui)備(bei)工(gong)作(zuo)中(zhong)某(mou)一(yi)環(huan)節(jie)的(de)疏(shu)忽(hu)可(ke)導(dao)致(zhi)實(shi)驗(yan)失(shi)敗(bai)或(huo)無(wu)法(fa)進(jin)行(xing)。準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)的(de)內(nei)容(rong)包(bao)括(kuo)器(qi)皿(min)的(de)清(qing)洗(xi)、幹燥與消毒
，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超淨台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

2、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的*培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）bichengniangetidezuzhirongyipeiyang，fenhuachengdudidezuzhibifenhuagaoderongyipeiyang，zhongliuzuzhibizhengchangzuzhirongyipeiyang。qucaihouyinglijichuli

，jinkuaipeiyang，yingubunengmashangpeiyangshi
，kejiangzuzhikuaiqiechenghuangdoubandadexiaokuai，zhi4℃depeiyangyezhongbaocun。quzuzhishiyingyangebaochiwujun，tongshiyeyaobimianjiechuqitadeyouhaiwuzhi。qubinglizuzhihepifujixiaohuadaoshangpixibaoshirongyidaijun，weijianshaowurankeyongkangjunsuchuli。

3
、培養

將jiang取qu得de的de組zu織zhi細xi胞bao接jie入ru培pei養yang瓶ping或huo培pei養yang板ban中zhong的de過guo程cheng稱cheng為wei培pei養yang。如ru係xi組zu織zhi塊kuai培pei養yang，則ze直zhi接jie將jiang組zu織zhi塊kuai接jie入ru培pei養yang器qi皿min底di部bu，幾ji個ge小xiao時shi後hou組zu織zhi塊kuai可ke貼tie牢lao在zai底di部bu，再zai加jia入ru培pei養yang基ji。如ru係xi細xi胞bao培pei養yang，一yi般ban應ying在zai接jie入ru培pei養yang器qi皿min之zhi前qian進jin行xing細xi胞bao計ji數shu
，按an要yao求qiu以yi一yi定ding的de量liang（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後
，立即放入培養箱中
，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常
，有無汙染，培養基的pH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO₂濃度也要定時檢查。

原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在(zai)潛(qian)伏(fu)期(qi)細(xi)胞(bao)一(yi)般(ban)不(bu)分(fen)裂(lie)，但(dan)可(ke)貼(tie)壁(bi)和(he)遊(you)走(zou)。過(guo)了(le)潛(qian)伏(fu)期(qi)後(hou)細(xi)胞(bao)進(jin)入(ru)旺(wang)盛(sheng)的(de)分(fen)裂(lie)生(sheng)長(chang)期(qi)。細(xi)胞(bao)長(chang)滿(man)瓶(ping)底(di)後(hou)要(yao)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)，將(jiang)一(yi)瓶(ping)中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)懸(xuan)浮(fu)後(hou)分(fen)至(zhi)兩(liang)到(dao)三(san)瓶(ping)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。每(mei)傳(chuan)代(dai)一(yi)次(ci)稱(cheng)為(wei)“一代”。二倍體細胞一般隻能傳幾十代，而轉化細胞係或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。

4
、凍存及複蘇

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株
，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度（-196℃），將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）depeiyangji，yiyidingdelengquesududongcun
，baocunyuyedanzhong。zaididewenduxia
，xibaobaocundeshijianjihushiwuxiande。fusuyibancaiyongkuairongfangfa
，jicongyedanzhongquchudongcunguanhou
，lijifangru37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。

凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及複蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

5、常用儀器設備

無菌室、超淨工作台、三重純水蒸餾器、抽氣泵、壓力蒸氣消毒器、電熱恒溫培養箱、培養器具、CO₂培養箱
、恒溫水浴鍋、倒置顯微鏡、離心機
、無菌過濾器、洗刷裝置、細胞計數板和電子細胞技術儀等等。