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24孔板Transwell實驗的門道，但實際操作中總會遇到些小狀況。
一、細胞接種與生長問題
細胞生長不均或局部死亡
現象：換液後部分孔細胞死亡，形成"半圓分界線"。
原因：培養箱架子不水平導致液體分布不均;培養基溫度過低(如直接從4℃冰箱取出)造成冷休克。
解決：確保培養箱水平;將培養基提前在37℃培養箱平衡15-30分鍾。
細胞分布不均
現象：接種後細胞聚集在孔邊緣，細胞稀疏。
原因：加液方式不當導致液體表麵張力效應; 培養基體積不足形成彎液麵。
解決：使用多道移液器均勻加液;確保每孔加液量充足(通常500-650μL)。
二、Transwell小室操作問題
氣泡產生
現象：小室放入下室時產生氣泡，影響趨化梯度。
解決：放置後若見氣泡，用鑷子輕提小室去除，再放回。
基質膠鋪板問題
現象：鋪膠後膠體不均勻或凝固不良。
解決：Matrigel基質膠用無血清培養基按1:8比例稀釋，取60μL均勻鋪於上室，37℃孵育1-4小時。
三、汙染與蒸發問題
現象：培養物汙染或液體蒸發。
原因：培養板蓋子較鬆，利於氣體交換但增加汙染和蒸發風險。
解決：保持培養箱內清潔，放置無菌水槽維持濕度100%。
四、其他常見問題
細胞狀態不佳：接種前細胞應處於對數生長期，活力良好。
培養時間不當：根據細胞類型優化時間。
換液操作不當：在通風櫥內換液時，關閉風機或逐孔操作，避免氣流導致培養基快速蒸發。
