細xi胞bao培pei養yang技ji術shu中zhong，細xi胞bao計ji數shu是shi一yi項xiang基ji本ben功gong，對dui於yu標biao準zhun化hua培pei養yang條tiao件jian以yi及ji需xu要yao定ding量liang的de實shi驗yan來lai說shuo都dou關guan鍵jian。這zhe裏li介jie紹shao使shi用yong血xue細xi胞bao計ji數shu器qi對dui細xi胞bao進jin行xing計數的經典方法以及中間一些需要注意的細節。

製備細胞懸液：

對於貼壁生長的細胞，我們需要使用胰酶消化的方法使細胞從培養皿表麵脫落

根據需要加入合適體積的培養基，將細胞進行中和及稀釋，以得到均質的細胞懸液。要求盡可能將細胞吹打散開，不要殘留任何細胞團

準備血細胞計數器：

使用70%乙醇將蓋玻片和血細胞計數器清潔幹淨

將將蓋玻片潤濕（使用水或呼一口氣
，目的是使蓋玻片與血細胞計數器接觸更緊密，易於粘連），並覆蓋至血細胞計數器上

台盼蘭染色（可選）：

如果需要計算細胞的活力，則需要將細胞懸液和0.4%台盼蘭等體積混合

室溫孵育3-5分鍾，使台盼蘭進入死細胞，使死細胞著藍色

血細胞計數器加樣：

使用吸管將細胞懸液或細胞/台盼蘭混合液滴加到血細胞計數器計數池的邊緣。此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池

以同樣的方式在另一側的計數池中也加入細胞懸液

將計數板放置幾分鍾使細胞擴散，同時用吸水紙吸除多餘的液體

細胞計數：

在100倍顯微鏡下，移動計數板將視野對準計數板的中央大方塊，該方塊四周有一圈3條平行線包圍，中間有密集的網格。中央方塊區差不多剛好可以填滿整個視野。

使用手持式計數器記錄計數池四個角以及中央方塊內的細胞數（1-5號位置
，經典的current-protocol推薦每個方塊細胞數應不大於20-50），bingzhongfujilulingyicejishuchizhongdexibaoshu，zongjishigefangkuai。jishudefangfashizhijisuanshangbianhezuobianyaxiandexibao

，eryoubianhexiabianyaxiandexibaobuyujisuan（下圖，總體原則是“計上不計下，計左不計右”
，判斷標準為是否接觸三條邊線的中間線）。如(ru)果(guo)有(you)多(duo)個(ge)細(xi)胞(bao)沒(mei)有(you)吹(chui)散(san)成(cheng)團(tuan)存(cun)在(zai)，此(ci)時(shi)隻(zhi)可(ke)記(ji)為(wei)一(yi)個(ge)細(xi)胞(bao)。如(ru)果(guo)團(tuan)塊(kuai)很(hen)多(duo)，則(ze)可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)重(zhong)新(xin)吹(chui)打(da)甚(shen)至(zhi)消(xiao)化(hua)直(zhi)至(zhi)絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)為(wei)單(dan)個(ge)細(xi)胞(bao)