一、紡錘體阻斷劑(Spindle inhibitor)
zaiyousifenlieguochengzhong,suizhefangchuisidexingcheng,ransetibeiqianyindaoyiqinanyiguanchaqixingtai。fangchuitidexingchengzaiyuxibaozhihefangchuitichengfendezhanduzhijiandepingheng,yinci,gaibianxibaozhidezhandu,jikepohuaifangchuitixingcheng,congershideransetijunyunsankai,qieransetiyihenqugengweiqingchu。
在(zai)培(pei)養(yang)中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)紡(fang)錘(chui)體(ti)阻(zu)斷(duan)劑(ji)為(wei)秋(qiu)水(shui)仙(xian)素(su),在(zai)終(zhong)止(zhi)培(pei)養(yang)前(qian)加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)秋(qiu)水(shui)仙(xian)素(su),使(shi)正(zheng)在(zai)分(fen)裂(lie)的(de)細(xi)胞(bao)停(ting)留(liu)在(zai)中(zhong)期(qi),以(yi)獲(huo)得(de)大(da)量(liang)分(fen)裂(lie)相(xiang)供(gong)分(fen)析(xi)之(zhi)用(yong)。秋(qiu)水(shui)仙(xian)素(su)的(de)濃(nong)度(du)範(fan)圍(wei)比(bi)較(jiao)寬(kuan),一(yi)般(ban)使(shi)用(yong)濃(nong)度(du)0.05―0.8微克/毫升,在終止培養前處理2―4小(xiao)時(shi)。但(dan)在(zai)實(shi)際(ji)工(gong)作(zuo)中(zhong)需(xu)要(yao)借(jie)助(zhu)濃(nong)度(du)和(he)處(chu)理(li)時(shi)間(jian)來(lai)控(kong)製(zhi)染(ran)色(se)體(ti)的(de)收(shou)縮(suo)程(cheng)度(du)。秋(qiu)水(shui)仙(xian)素(su)作(zuo)用(yong)時(shi)間(jian)越(yue)長(chang),被(bei)阻(zu)斷(duan)的(de)中(zhong)期(qi)分(fen)裂(lie)相(xiang)越(yue)多(duo),但(dan)是(shi)染(ran)色(se)體(ti)也(ye)越(yue)凝(ning)聚(ju)和(he)收(shou)縮(suo),所(suo)以(yi)還(hai)視(shi)各(ge)實(shi)驗(yan)室(shi)經(jing)驗(yan)而(er)定(ding)。
二、低滲液(hypotonic solution)
低滲液是指滲透壓和離子強度均低於正常細胞生理條件的溶液,例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀(0.65M)、氯化鉀(0.075M)等。低滲效果取決於低滲液的化學組成、低(di)滲(shen)的(de)溫(wen)度(du)和(he)處(chu)理(li)時(shi)間(jian)。低(di)滲(shen)處(chu)理(li)是(shi)憑(ping)借(jie)反(fan)滲(shen)透(tou)作(zuo)用(yong)使(shi)細(xi)胞(bao)膨(peng)脹(zhang)染(ran)色(se)體(ti)鋪(pu)展(zhan),同(tong)時(shi)可(ke)使(shi)粘(zhan)附(fu)於(yu)染(ran)色(se)體(ti)的(de)核(he)仁(ren)物(wu)質(zhi)散(san)開(kai),以(yi)便(bian)能(neng)在(zai)一(yi)個(ge)平(ping)麵(mian)上(shang)觀(guan)察(cha)所(suo)有(you)染(ran)色(se)體(ti)形(xing)態(tai)。
實驗室中一般選用0.075M KCl為低滲液(具體情況取決於實際操作,鑒於實驗的連續性和穩定性,本實驗室采用0.35%KCl),其優點有:①染色體輪廓清楚,可染色性強,染色時間短,②用於顯帶染色時能充分顯示帶型特點。
低滲處理為37℃,15-25分鍾,以預實驗條件為準。
三、固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透細胞,將其固定並維持染色體結構的完整性,還要能夠增強染色體的嗜堿性,達到優良染色效果。
單純的固定液一般難以達到這些要求,因此在實驗中使用兩種混和的固定液。由於Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是效果良好的固定液。Carnoy固定液(甲醇:冰乙酸=3:l)每次使用前需臨時配製,長時間放置影響固定效果,固定時間15分鍾至24小時,冰箱、室溫均可。必要時可改變甲醇和冰乙酸的比例,冰乙酸比例增加,利於細胞膨脹、染色體鋪展,但易導致細胞破裂、染色體散失。
四、滴片
滴(di)片(pian)使(shi)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)從(cong)一(yi)定(ding)高(gao)處(chu)落(luo)在(zai)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang),淋(lin)巴(ba)母(mu)細(xi)胞(bao)膜(mo)破(po)裂(lie),染(ran)色(se)體(ti)分(fen)散(san)開(kai)。載(zai)玻(bo)片(pian)可(ke)用(yong)冰(bing)片(pian)和(he)幹(gan)片(pian),效(xiao)果(guo)均(jun)好(hao)。滴(di)片(pian)後(hou)需(xu)空(kong)氣(qi)幹(gan)燥(zao)。
五、Giemsa染色
Giemsa染料不是一種單一染料,而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物,配製後原液儲存。在常規染色中,並不比其他染料優越,但在顯帶技術中,卻是無可比擬的。
Giemsa工作液在使用前臨時配製,濃度可在2.5-10%之間(原液2份加pH7.4磷酸緩衝液10-40份)。染色後,染色質呈紅色,細胞核是藍色。
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