1.非特異性擴增帶
PCR擴增後出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現,其原因:
一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。
二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCRxunhuancishuguoduoyouguan。qicishimeidezhiheliang,wangwangyixielaiyuandemeiyichuxianfeiteyitiaodaierlingyilaiyuandemeizebuchuxian,meiliangguoduoyoushiyehuichuxianfeiteyixingkuozeng。
其對策有:必bi要yao時shi重zhong新xin設she計ji引yin物wu。減jian低di酶mei量liang或huo調tiao換huan另ling一yi來lai源yuan的de酶mei。降jiang低di引yin物wu量liang,適shi當dang增zeng加jia模mo板ban量liang,減jian少shao循xun環huan次ci數shu。適shi當dang提ti高gao退tui火huo溫wen度du或huo采cai用yong二er溫wen度du點dian法fa(93℃變性,65℃左右退火與延伸)。
2.片狀拖帶或塗抹帶
PCR擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。
其原因往往由於
(1)酶量過多或酶的質量差
(2)dNTP濃度過高
(3)Mg2+濃度過高
(4)退火溫度過低
(5)循環次數過多
其對策有:
(1)減少酶量,或調換另一來源的酶
(2)減少dNTP的濃度
(3)適當降低Mg2+濃度
(4)增加模板量
(5)減少循環次數
手機版








