進行PCR操作時
，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR汙染或杜絕汙染的出現。

1.劃分操作區：

目前
，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和後處理要在不同的隔離區內進行：

(1)標本處理區
，包括擴增摸板的製備。

(2)擴增區，包括反應液的配製和PCR擴增。

(3)產物分析區，凝膠電泳分析，產物拍照及重組克隆的製備。

(4)各工作區要有一定的隔離，操作器材專用，要有一定的方向性。如：標本製備→PCR擴增→產物分析→產物處理。

切記：產物分析區的產物及器材不要拿到其他兩個工作區。

2.分裝試劑：

PCR擴(kuo)增(zeng)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)試(shi)劑(ji)均(jun)應(ying)在(zai)裝(zhuang)有(you)紫(zi)外(wai)燈(deng)的(de)超(chao)淨(jing)工(gong)作(zuo)台(tai)或(huo)負(fu)壓(ya)工(gong)作(zuo)台(tai)配(pei)製(zhi)和(he)分(fen)裝(zhuang)。所(suo)有(you)的(de)加(jia)樣(yang)器(qi)和(he)吸(xi)頭(tou)需(xu)固(gu)定(ding)放(fang)於(yu)其(qi)中(zhong)，不(bu)能(neng)用(yong)來(lai)吸(xi)取(qu)擴(kuo)增(zeng)後(hou)的(de)DNA和其他來源的DNA：

(1) PCR用水應為高壓的雙蒸水。

(2) 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產物區配製。

(3)引物和dNTP應分裝儲存，分裝時應標明時間，以備發生汙染時查找原因。

3. 實驗操作注意事項：

jinguankuozengxuliedecanliuwurandabufenshijiayangxingfanyingdeyuanyin，yangpinjiandejiaochawuranyeshiyuanyinzhiyi。yinci
，bujinyaozaijinxingkuozengfanyingshijinshenrenzhen，zaiyangpindeshouji、抽提和擴增的所有環節都應該注意：

(1)戴一次性手套，若不小心濺上反應液
，立即更換手套。

(2)使用一次性吸頭


，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露於空氣中，避免氣溶膠的汙染。

(3)bimianfanyingyefeijian，dakaifanyingguanshiweibimiancizhongqingkuang
，kaigaiqianshaolixinshoujiyetiyuguandi。ruobuxiaoxinjiandaoshoutaohuozhuomianshang，yinglikegenghuanshoutaobingyongxisuancashizhuomian。

(4)操作多份樣品時，製備反應混合液
，先將dNTP、緩衝液、引物和酶混合好，然後分裝，這樣即可以減少操作，避免汙染，又可以增加反應的精確度。

(5)最後加入反應模板，加入後蓋緊反應管。

(6)操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性
，又可以協助判斷擴增係統的可信性。

(7)盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由於加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的汙染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器


，至少PCR操作過程中加樣器應該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區。

(8)重複實驗，驗證結果，慎下結論。