1.酶標儀的工作原理及結構
由酶聯免疫吸附實驗法可知,酶標儀應該用比色法來分析抗原或抗體的含量,即它應依照比色原理進行工作。實際上,酶標儀就是一台變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計幾乎相同。
guangyuandengfachudeguangxianjingguolvguangpianhuodanseqihou,chengweiyishudanseguangshu。gaidanseguangshujingguosuliaoweikongbanzhongdedaicebiaoben,beibiaobenxishoudiaoyibufenhou,daodaguangdianjianceqi。guangdianjianceqijiangtoushedaoqishangmiandeguangxinhaodeqiangruobianchengdianxinhaodedaxiao。此電信號經前置放大、對數放大、模數轉換等模擬信號處理後,送入微處理器進行數據處理和計算。最後由顯示器和打印機將測試結果顯示、打印出來。
微處理機還通過控製電路來控製X、Y方向的機械驅動機構的運動。但對於非自動型的酶標儀,它是用手工來移動微孔板的,可以省去X、Y方向的機械驅動機構及其電路,這樣的儀器體積更小,結構也更簡單。
微孔板是一種用來盛裝待測樣本的透明塑料板,板上有多排小孔,如有40孔板、55孔板和96孔板等多種規格。每個小孔可以盛放零點幾毫升的溶液。根據儀器的不同,既可以一個孔一個孔地檢測,也可以一排孔一排孔地檢測。
酶標儀既可以使用和分光光度計相同的單色器,也可以使用幹涉濾光片來獲得單色光。和光電比色計一樣,使用濾光片作過濾裝置時,將濾光片設計到微孔板的前麵和後麵效果是一樣的。
光源燈發出的光,經過聚光鏡、光闌後,到達反射鏡,經反射鏡作90°反射後,垂直通過比色液,然後再經濾光片到達光電管。
一般酶標儀的光束既可以設計成從上到下通過比色液,也可以設計成從下到上通過比色。
酶標儀有單通道和多通道兩種類型,單通道又分為自動型和手動型兩種。其中,自動型的儀器設有X和Y兩個方向的驅動機構,在機械裝置的驅動下,微孔板上的小孔一個個依次進入光束下麵測試。手動型靠手移動微孔板來進行測量。
在單通道酶標儀的基礎上,又發展了多通道、全自動型酶標儀。多通道酶標儀一般都是自動型的,它設有多個光束和多個光電檢測器。如8通道的儀器,設有8條光束(或8個光源)、8個檢測器和8個放大器。在機械驅動裝置的作用下,樣品被8個一排、8個一排檢測。多通道酶標儀的檢測速度快,但其結構比較複雜,價格也較貴,多用於大中型醫院。
酶標儀的其他部分的結構,與光電比色計和小型生化分析儀基本相同。
酶標儀和普通光電比色計的不同之處在於:
1)盛sheng裝zhuang比bi色se液ye的de容rong器qi不bu是shi使shi用yong比bi色se皿min,而er是shi使shi用yong了le塑su料liao微wei孔kong板ban,塑su料liao微wei孔kong板ban常chang用yong透tou明ming的de聚ju乙yi烯xi材cai料liao製zhi作zuo,之zhi所suo以yi采cai用yong塑su料liao微wei孔kong板ban來lai作zuo固gu相xiang載zai體ti,是shi利li用yong它ta對dui抗kang原yuan或huo抗kang體ti有you較jiao強qiang的de吸xi附fu這zhe一yi特te點dian;
2)酶標儀的光束是垂直通過待測液的;
3)酶標儀通常不使用A而是使用光密度OD來表示吸光度。
酶標儀和分光光度計的主要區別是什麼呢?具體差別體現在以下三個方麵:
1)盛裝待測溶液的容器:分光光度計用的是比色皿,酶標儀使用的是塑料微孔板(酶標板)。比色皿隻能起到盛裝溶液的作用,每個比色皿一次隻能盛裝一種溶液。
酶標板常用透明的聚乙烯材料製成,對抗原抗體有較強的吸附作用,因此用它作為固相載體,酶標板通常為48孔或96孔,每個微孔可以盛裝不同的溶液。
2)光路的方向:分光光度計是水平光路,而酶標儀則是垂直光路。由於酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線隻能垂直穿過,因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。
垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液麵是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
3)光路的長度:由於光密度(OD值)與吸光係數,待測組分的濃度以及光路長度成正比關係。
分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm,所以光路長度固定為1cm。因此不同儀器,不同批次測量的數據具有同樣的可比性。
酶標儀采用的是垂直光路,所以光路的長度應該是液體液麵的高度,所以測得的值受到樣品的體積的影響。
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