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聚丙烯酰胺凝膠電泳 可用於蛋白和寡核苷酸的分離，最常用於蛋白質的分離，這裏總結了DNA電泳的各種濃度PAGE膠配製的配方及製備方法。
聚丙烯酰胺 凝膠電泳簡稱為PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是(shi)以(yi)聚(ju)丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)凝(ning)膠(jiao)作(zuo)為(wei)支(zhi)持(chi)介(jie)質(zhi)。聚(ju)丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)凝(ning)膠(jiao)是(shi)由(you)單(dan)體(ti)的(de)丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)和(he)甲(jia)叉(cha)雙(shuang)丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)聚(ju)合(he)而(er)成(cheng)，這(zhe)一(yi)聚(ju)合(he)過(guo)程(cheng)需(xu)要(yao)有(you)自(zi)由(you)基(ji)催(cui)化(hua)完(wan)成(cheng)。
各種濃度PAGE膠的配製(DNA電泳用)
50ml體係：
|
丙烯酰胺 |
有效分離（bp) |
二甲苯青 |
溴酚藍 |
丙烯酰胺30%（ml） |
10×TBE（ml) |
ddH2O（ml） |
TEMED（µl） |
過硫酸銨10%（µl） |
|
3.5% |
100-1000 |
460 |
100 |
5.83 |
5 |
39.17 |
25.0 |
250 |
|
5.0% |
100-500 |
260 |
65 |
8.33 |
5 |
36.67 |
25.0 |
250 |
|
8.0% |
60-400 |
160 |
45 |
13.33 |
5 |
31.67 |
25.0 |
250 |
|
12.0% |
40-200 |
70 |
20 |
20.0 |
5 |
25.00 |
25.0 |
250 |
|
15.0% |
25-150 |
60 |
15 |
25.0 |
5 |
20.00 |
25.0 |
250 |
|
20.0% |
5-100 |
45 |
12 |
33.33 |
5 |
11.67 |
25.0 |
250 |
5ml體係：
|
丙烯酰胺 |
丙烯酰胺30% |
10×TBE |
ddH2O |
TEMED |
過硫酸銨10% |
|
3.5% |
0.583 |
0.5 |
3.917 |
2.5 |
25 |
|
5.0% |
0.833 |
0.5 |
3.667 |
2.5 |
25 |
|
8.0% |
1.333 |
0.5 |
3.167 |
2.5 |
25 |
|
12.0% |
2.00 |
0.5 |
2.5 |
2.5 |
25 |
|
15.0% |
2.50 |
0.5 |
2.0 |
2.5 |
25 |
|
20.0% |
3.333 |
0.5 |
1.167 |
2.5 |
25 |
1、丙烯酰胺30%為29：1(質量比，丙烯酰胺：雙甲叉丙烯酰胺)
2、TEMED 可以加到1ul/ml。
不同濃度丙烯酰胺和DNA的有效分離範圍表
|
丙烯酰胺(%) |
有效分離範圍(bp) |
溴酚蘭* |
二甲苯青* |
|
3.5 |
100～2000 |
100 |
460 |
|
5.0 |
80～500 |
65 |
260 |
|
8.0 |
60～400 |
45 |
160 |
|
12.0 |
40～200 |
30 |
70 |
|
15.0 |
25～150 |
15 |
60 |
|
20.0 |
10～100 |
12 |
45 |
*表中給出的數字為與指示劑遷移率相等的雙鏈DNA分子 所含堿基對數目(bp).
凝膠的製備過程：
1、 按要求裝配好垂直電泳板，兩塊玻璃板的兩側及底部用1%的瓊脂糖封邊，防止封閉不嚴而使聚丙烯酰胺液漏出。
2、 將裝好的玻璃電泳板傾斜成45～60°。
3、 按表3配製所需%濃度凝膠的毫升數。
4、 加入TEMED後，立即混勻，緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中，直到液體接近溢出時為止。
5、 立即插入適當的梳子，密切注意防止梳齒下產生氣泡，用一有力的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上，然後將玻璃板斜靠在物體上，使成10°角，可減少液體泄漏的機會。
6、 室溫聚合一小時後，將玻璃板插入電泳槽中，上緊，倒入0.1XTBE緩衝液。
7、 小心取出梳子，加樣。
大家可以根據自己試驗中DNA片段大小的不同選擇配製合適濃度的丙烯酰胺膠。PAGE膠配製過程中記得避免氣泡的產生。
