瓊脂糖凝膠電泳的分析原理與其他支持物電泳主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。
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蛋白質和核酸會根據pH不同帶有不同電荷,在電場中受力大小不同,因此跑的速度不同,根據這個原理可將其分開。電泳緩衝液的pH在6~9之間,離子強度0.02~0.05為適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的DNA 片段,其分辨率雖比聚丙烯酰胺凝膠低,但它製備容易,分離範圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的範圍為0.2-20kb,利用脈衝電泳,可分離高達107bp的DNA 片段。
DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電荷,在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重複性質,相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的淨電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。
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