相差顯微鏡(phasecontrast microscope)由P.Zernike於1932年發明,並因此獲1953年諾貝爾物理獎。這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未經染色的標本和活細胞。
相xiang差cha顯xian微wei鏡jing的de基ji本ben原yuan理li是shi,把ba透tou過guo標biao本ben的de可ke見jian光guang的de光guang程cheng差cha變bian成cheng振zhen幅fu差cha,從cong而er提ti高gao了le各ge種zhong結jie構gou間jian的de對dui比bi度du,使shi各ge種zhong結jie構gou變bian得de清qing晰xi可ke見jian。光guang線xian透tou過guo標biao本ben後hou發fa生sheng折zhe射she,偏pian離li了le原yuan來lai的de光guang路lu,同tong時shi被bei延yan遲chi了le1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光合軸後幹涉加強,振幅增大或減下,提高反差。在構造上,相差顯微鏡有不同於普通光學顯微鏡兩個特殊之處:
1.環形光闌(annular diaphragm) 位於光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標本上。
2.相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
1.A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸後光波相加,振幅加大,標本結構比周圍介質更加變亮,形成亮反差(或稱負反差)。
2.B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸後光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結構比周圍介質更加變暗。
相差顯微鏡照明原理
一種介殼蟲的染色體(PCM照片)
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