分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)是(shi)利(li)用(yong)物(wu)質(zhi)對(dui)光(guang)的(de)選(xuan)擇(ze)性(xing)吸(xi)收(shou)的(de)特(te)性(xing)
，以(yi)較(jiao)純(chun)的(de)單(dan)色(se)光(guang)作(zuo)為(wei)入(ru)射(she)光(guang)，測(ce)定(ding)物(wu)質(zhi)對(dui)光(guang)的(de)吸(xi)收(shou)
，從(cong)而(er)對(dui)物(wu)質(zhi)進(jin)行(xing)定(ding)性(xing)或(huo)定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)的(de)儀器。在使用過程中常常會出現測量誤差
，這些誤差又是如何產生的呢？

比bi耳er定ding律lv成cheng立li的de前qian提ti條tiao件jian是shi人ren射she光guang是shi單dan色se光guang，但dan是shi精jing度du再zai高gao的de儀yi器qi
，即ji使shi是shi雙shuang單dan色se器qi的de分fen光guang光guang度du計ji，也ye隻zhi能neng獲huo得de近jin乎hu單dan色se的de光guang，無wu法fa獲huo得de純chun單dan色se光guang
，它ta仍reng然ran含han有you狹xia窄zhai光guang通tong帶dai，具ju有you複fu色se光guang的de性xing質zhi。而er複fu色se光guang會hui導dao致zhi比bi耳er定ding律lv的de正zheng或huo負fu偏pian離li。

固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm
，可調狹縫的可以做到0.Inm
；可見分光光度計帶寬6nm
、snm
，甚至十幾納米。

光guang譜pu帶dai寬kuan應ying該gai是shi越yue小xiao越yue好hao，但dan是shi隨sui著zhe光guang譜pu分fen辨bian率lv的de提ti高gao
，儀yi器qi的de靈ling敏min度du降jiang低di，所suo以yi選xuan擇ze儀yi器qi時shi要yao綜zong合he考kao慮lv各ge種zhong條tiao件jian的de影ying響xiang。當dang溶rong液ye濃nong度du較jiao小xiao且qie單dan色se光guang較jiao純chun時shi，可ke近jin似si認ren為wei符fu合he比bi耳er定ding律lv。

雜散光是指進人檢測器的處於待測波長光譜帶寬範圍外的其他波長組分，它是光譜測量中誤差的主要來源。

產生原因有:分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處，由於單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低
，雜散光的影響更為顯著。

雜(za)散(san)光(guang)限(xian)製(zhi)儀(yi)器(qi)的(de)分(fen)析(xi)上(shang)限(xian)可(ke)引(yin)起(qi)嚴(yan)重(zhong)的(de)測(ce)量(liang)誤(wu)差(cha)
，實(shi)際(ji)工(gong)作(zuo)中(zhong)
，在(zai)定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)時(shi)
，一(yi)般(ban)在(zai)吸(xi)收(shou)峰(feng)或(huo)其(qi)附(fu)近(jin)處(chu)測(ce)量(liang)樣(yang)品(pin)吸(xi)光(guang)度(du)
，如(ru)果(guo)在(zai)分(fen)析(xi)波(bo)長(chang)處(chu)含(han)有(you)雜(za)散(san)光(guang)，這(zhe)時(shi)樣(yang)品(pin)的(de)透(tou)光(guang)率(lv)較(jiao)小(xiao)
，而(er)雜(za)散(san)光(guang)大(da)部(bu)分(fen)透(tou)過(guo)，使(shi)測(ce)量(liang)吸(xi)光(guang)度(du)低(di)於(yu)真(zhen)實(shi)吸(xi)光(guang)度(du)。

儀器噪聲也是儀器的一個重要指標，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線
，可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。

樣(yang)品(pin)的(de)每(mei)一(yi)個(ge)值(zhi)都(dou)是(shi)在(zai)一(yi)定(ding)的(de)波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)得(de)的(de)，如(ru)果(guo)波(bo)長(chang)誤(wu)差(cha)很(hen)大(da)
，測(ce)出(chu)的(de)值(zhi)肯(ken)定(ding)不(bu)準(zhun)。吸(xi)光(guang)度(du)準(zhun)確(que)度(du)也(ye)是(shi)用(yong)戶(hu)對(dui)儀(yi)器(qi)的(de)直(zhi)接(jie)要(yao)求(qiu)
，更(geng)應(ying)引(yin)起(qi)足(zu)夠(gou)的(de)重(zhong)視(shi)。

國家計量檢定規程規定雙光束紫外可見分光光度計透射比準確度為A級士0.6%
， B級土1.0%。

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)的(de)測(ce)量(liang)實(shi)際(ji)上(shang)是(shi)以(yi)通(tong)過(guo)參(can)比(bi)池(chi)的(de)光(guang)強(qiang)度(du)作(zuo)為(wei)人(ren)射(she)光(guang)強(qiang)度(du)來(lai)測(ce)定(ding)試(shi)樣(yang)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)，先(xian)調(tiao)節(jie)儀(yi)器(qi)使(shi)透(tou)過(guo)參(can)比(bi)池(chi)溶(rong)液(ye)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)為(wei)零(ling)，然(ran)後(hou)讓(rang)同(tong)一(yi)束(shu)光(guang)通(tong)過(guo)樣(yang)品(pin)
，使(shi)得(de)吸(xi)光(guang)度(du)比(bi)較(jiao)真(zhen)實(shi)地(di)反(fan)映(ying)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度(du)，所(suo)以(yi)參(can)比(bi)溶(rong)液(ye)的(de)選(xuan)擇(ze)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)。

如ru果guo僅jin有you待dai測ce物wu質zhi與yu顯xian色se劑ji的de反fan應ying產chan物wu有you吸xi收shou
，可ke用yong純chun溶rong劑ji或huo蒸zheng餾liu水shui作zuo參can比bi溶rong液ye。如ru果guo顯xian色se劑ji有you顏yan色se，並bing在zai測ce定ding波bo長chang下xia有you吸xi收shou

，則ze用yong顯xian色se劑ji溶rong液ye作zuo參can比bi溶rong液ye，所suo加jia人ren顯xian色se劑ji及ji其qi它ta試shi劑ji的de量liang，與yu試shi樣yang中zhong的de加jia入ru量liang應ying一yi致zhi。

如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有幹擾，而所用顯色劑沒顏色

，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

正確選擇合適的溶劑，對提高分析的準確度起重要作用。為減小溶劑中雜質的影響

，應選擇高純度的溶劑；溶劑應不與待測物質發生化學反應；待測物在溶劑中要有一定的溶解度；在測定的波長範圍內，溶劑本身沒有吸收，注意常用溶劑的最短可用波長；當用揮發性大的溶劑時，測量過程中吸收池應加蓋。

當dang用yong分fen光guang光guang度du計ji對dui溶rong液ye進jin行xing測ce定ding時shi，首shou先xian需xu要yao選xuan擇ze合he適shi的de測ce量liang波bo長chang。選xuan擇ze的de依yi據ju是shi該gai被bei測ce溶rong液ye的de吸xi收shou曲qu線xian。在zai一yi般ban情qing況kuang下xia，我wo們men總zong是shi選xuan擇ze最zui大da吸xi收shou波bo長chang作zuo為wei測ce量liang波bo長chang，這zhe樣yang可ke以yi提ti高gao靈ling敏min度du。

而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有幹擾存在
，就不能選最大吸收波長，而必須在保證有一定靈敏度的情況下，選擇吸收曲線中的其它波長進行測定(曲線較平坦處對應的波長)，以消除幹擾。繪製吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。

分光光度計在使用過程中
，由於機械振動、溫度變化、燈絲變形
、燈deng座zuo鬆song動dong或huo更geng換huan燈deng泡pao等deng原yuan因yin，經jing常chang會hui出chu現xian刻ke度du盤pan上shang的de讀du數shu與yu實shi際ji通tong過guo溶rong液ye的de波bo長chang不bu符fu合he的de現xian象xiang，因yin而er導dao致zhi儀yi器qi靈ling明ming度du降jiang低di，影ying響xiang測ce定ding結jie果guo的de精jing度du，需xu要yao進jin行xing檢jian驗yan。

檢驗波長準確度最簡單的方法是用幹涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標準值之差超出規程規定, 則需要進行波長調節。

用透射比標準值分別為10 %、20 %

、30 %左右的光譜中性濾光片，可見光區分別在440
、546
、635nm波長處，以空氣為參比，分別測量各濾光片的透射比，紫外光區用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313
、350nm波長處，以高氯酸溶液為參比，測量其透射比。

在零點不受光的條件下
，用零點調節器將儀器調至零點
，觀察3分鍾讀取透射比的變化，即為零點穩定性。在儀器測量範圍兩端向中間靠10nm處

，調節零點後
，蓋上樣品室蓋(打開光門)，使光電管受光，調節透射比為95%（數顯儀器調至100%）察3分鍾讀取透射比的變化，為光電流穩定性。