一
、概要
三聚氰胺是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體

，形似蛋白粉，屬於三嗪類含氮雜環有機化合物
，廣泛應用於塑料、染料、化肥的生產和紡織行業。由於三聚氰胺分子含氮量很高，隻要添加到食品中就可在檢測中造成蛋白質含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉
、餅幹、奶糖等相關產品均發現有三聚氰胺殘留現象。動物實驗結果表明
，三聚氰胺的攝入可能會導致繁殖障礙、膀胱炎、慢性腎炎
、腎結石、甚至膀胱癌。現有的檢測三聚氰胺方法如液相色譜-質譜聯用法
、質譜電噴射離子技術其樣品前處理複雜
、所需儀器昂貴、操作複雜


、耗費時間。而使用三聚氰胺ELISA試劑盒能夠既快速又準確的分析樣品中三聚氰胺殘留。
三聚氰胺檢測試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，操作時間短於45min
，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
三聚氰胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方(fang)法(fa)，在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)微(wei)孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被(bei)三(san)聚(ju)氰(qing)胺(an)抗(kang)原(yuan)
，樣(yang)本(ben)殘(can)留(liu)的(de)三(san)聚(ju)氰(qing)胺(an)和(he)微(wei)孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被(bei)的(de)抗(kang)原(yuan)競(jing)爭(zheng)抗(kang)三(san)聚(ju)氰(qing)胺(an)抗(kang)體(ti)

，同(tong)時(shi)三(san)聚(ju)氰(qing)胺(an)抗(kang)體(ti)與(yu)酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang)相(xiang)結(jie)合(he)，加(jia)入(ru)TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。
適用範圍:
三聚氰胺檢測試劑盒可定性
、定量檢測牛奶、奶粉、飼料
、動物組織和雞蛋等樣本中三聚氰胺的殘留量。
交叉反應率:
三聚氰胺………………………………………………100%

三
、檢測步驟：
1
、將所需試劑從冷藏環境中取出
，置於室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板
，將不用的微孔放入自封袋，保存於2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4
、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行
，並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5

、加標準品/樣本：加標準品/樣本50l/孔到對應的微孔中，再加入酶標物50l/孔，再加入抗試劑50l/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置室溫25℃避光環境中反應30min。
6
、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩幹
，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次
，每次間隔30s



，用吸水紙拍幹（拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7
、顯色：加入底物液A液50l/孔
，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻
，用蓋板膜蓋板後置室溫25℃避光環境反應15min。
8
、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據）

，測定每孔OD值。(若無酶標儀
，則不加終止液用目測法可進行判定)。

四
、檢測方法靈敏度
、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：10ppb
樣本最低檢測限：
牛奶………………………………………………100ppb
雞蛋………………………………………………100ppb
組織………………………………………………100ppb
奶粉……………………………………………  500ppb
飼料……………………………………………  500ppb
回收率：
牛奶………………………………………………… 110±10%
雞蛋………………………………………………… 90±10%
組織………………………………………………… 80±10%
奶粉………………………………………………… 80±10%
飼料………………………………………………… 80±10%
精密度：
試劑盒的變異係數均小於10%

五

、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒於2~8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。