氯黴素檢測試劑盒可定性、定量檢測動物組織（含水產）、牛奶、蜂蜜

、飼料、雞蛋等樣品中氯黴素的殘留

一、概要
 氯黴素 （Chloramphenicol,CAP）曾(zeng)是(shi)應(ying)用(yong)廣(guang)泛(fan)的(de)抗(kang)菌(jun)素(su)，但(dan)由(you)於(yu)其(qi)存(cun)在(zai)嚴(yan)重(zhong)的(de)副(fu)作(zuo)用(yong)，能(neng)引(yin)起(qi)人(ren)的(de)再(zai)生(sheng)障(zhang)礙(ai)性(xing)貧(pin)血(xue)，粒(li)細(xi)胞(bao)缺(que)乏(fa)症(zheng)等(deng)疾(ji)病(bing)
，歐(ou)美(mei)等(deng)發(fa)達(da)國(guo)家(jia)已(yi)相(xiang)繼(ji)禁(jin)止(zhi)或(huo)嚴(yan)格(ge)禁(jin)止(zhi)使(shi)用(yong)。
 氯黴素檢測試劑盒是應用ELISA技術研發的新一代藥物殘留檢測產品，操作時間僅需45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
 氯黴素檢測試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被氯黴素抗體，樣品中殘留的氯黴素和酶標氯黴素抗原競爭微孔條上預包被的抗體，經TMB底物顯色，樣品吸光值與其殘留物氯黴素的含量成負相關
，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中氯黴素的含量。

三、交叉反應率
氯黴素………………………………………………………100％
氯黴素堿……………………………………………………0.5％
甲基氯黴素……………………………………………≤0.05％
氟苯尼考…………………………………………………<0.01%
氟苯尼考胺………………………………………………<0.1%
*注：標準品濃度為0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb

四、操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置於室溫（20～25℃）平衡30min以上
，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板

，將不用的微孔放入自封袋
，保存於2～8℃。
3
、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品/標準品對應微孔按序編號，並記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
5
、加標準品/樣品：加標準品/樣品70l到對應的微孔中

，再加入氯黴素酶標物30l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩幹，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍幹（拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻
，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應15～20min。
8
、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據）
，測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。

五、檢測方法靈敏度
、準確度
、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
樣品最低檢測限：
組織樣品……………………………………………0.1ppb
牛奶………………………………………………0.05ppb
飼料……………………………………………0.2ppb
蛋…………………………………………………………0.05ppb
蜂蜜…………………………………………………0.05ppb
回收率：
組織樣品……………………………………………… 102±15%
牛奶………………………………………………… 110±10%
飼料………………………………………………………93±10%
蛋………………………………………………………95±15%
蜂蜜………………………………………………………80±10%
精密度：試劑盒的變異係數均小於10%

六
、注意事項
1
、室溫低於20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2
、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會出現標準曲線不成線性
，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5
、不要使用過了有效日期的試劑盒
；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件:保存試劑盒於2～8℃，不要冷凍
，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7
、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小於0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8
、在加入底物液A液和底物液B液後
，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺

，可延長反應時間到30min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應時間。
9、該試劑盒最佳反應溫度為25℃
，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

七
、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒於2～8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。