1.1 菌株的采集

實(shi)驗(yan)室(shi)用(yong)菌(jun)種(zhong)一(yi)是(shi)到(dao)國(guo)家(jia)法(fa)定(ding)機(ji)構(gou)采(cai)購(gou)，二(er)是(shi)購(gou)買(mai)商(shang)業(ye)派(pai)生(sheng)菌(jun)種(zhong)，三(san)是(shi)科(ke)研(yan)中(zhong)菌(jun)種(zhong)交(jiao)流(liu)。不(bu)管(guan)是(shi)哪(na)種(zhong)來(lai)源(yuan)，均(jun)統(tong)一(yi)采(cai)集(ji)。采(cai)集(ji)中(zhong)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)規(gui)範(fan)執(zhi)行(xing)。要(yao)求(qiu)包(bao)裝(zhuang)可(ke)靠(kao)

，采(cai)集(ji)迅(xun)速(su)
，不(bu)泄(xie)漏(lou)不(bu)汙(wu)染(ran)。保(bao)證(zheng)菌(jun)種(zhong)合(he)格(ge)和(he)環(huan)境(jing)安(an)全(quan)。采(cai)集(ji)中(zhong)要(yao)有(you)菌(jun)種(zhong)傳(chuan)代(dai)標(biao)識(shi)。選(xuan)擇(ze)有(you)資(zi)質(zhi)的(de)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)的(de)合(he)格(ge)供(gong)應(ying)商(shang)，每(mei)批(pi)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)必(bi)須(xu)附(fu)帶(dai)有(you)供(gong)應(ying)商(shang)的(de)合(he)格(ge)證(zheng)或(huo)檢(jian)測(ce)報(bao)告(gao)或(huo)說(shuo)明(ming)書(shu)
，來(lai)證(zheng)明(ming)所(suo)采(cai)購(gou)的(de)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)是(shi)合(he)格(ge)的(de)。

1.2 標準菌株和驗收

實(shi)驗(yan)室(shi)收(shou)到(dao)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)

，首(shou)先(xian)應(ying)進(jin)行(xing)符(fu)合(he)性(xing)感(gan)官(guan)檢(jian)查(zha)，記(ji)錄(lu)菌(jun)株(zhu)號(hao)和(he)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)來(lai)源(yuan)途(tu)徑(jing)信(xin)息(xi)，確(que)保(bao)溯(su)源(yuan)性(xing)清(qing)楚(chu)。同(tong)時(shi)還(hai)應(ying)記(ji)錄(lu)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)名(ming)稱(cheng)和(he)數(shu)量(liang)、生產日期、接收日期和有無破損等情況。

1.3 凍幹標準菌株的複活

1.3.1 開啟產品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝
，再打開使用。

1.3.2 複活：選擇合適的培養基和培養條件（根據菌種使用說明書，見附錄）jinxingfuhuo。junzhongdeshoucihuohuazuihaoshizaifeixuanzexingqiongzhipeiyangjishang，chufeiteshuqingkuanghuotebietuijian，yibanbuyongyetipeiyangji。dongganjunzhudechuandaicishubudechaoguo5代，從標準菌株保藏中心購買的凍幹標準菌株為第0代。

1.4 工作菌株確認方法及依據

用無菌接種環取上述培養物，在相應的培養基平板（營養瓊脂、大豆胰蛋白腖瓊脂）上或相應的細菌鑒別平板（如伊紅美藍、麥康凱、BP等上劃線分離單個菌落，置適宜條件下培養（若該類微生物為厭氧菌
，則培養條件應為厭氧條件）。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA（薩布羅培養基）平板上或玫瑰紅鈉培養基平板上，23～28℃下培養7d；培養後觀察是否具有典型的菌落狀態，然後挑取單一純菌落，進行革蘭染色、鏡檢，觀察其染色特征及菌體形態以確定菌種。

1.5 汙染處理

jiaruzaigaipingbanshangfaxianyouqitajunluoshengchang
，zeshuomingcaozuoyouwuranhuojunzhongbuchun。yaojianggaiwuranpeiyangwuzuomiejunchuli，xunzhaoyuanyin

，zhongxinfenlitiaoxuanchunjunluo。

1.6 菌種保存

所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存於專用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記台帳，詳細記錄菌種采集

、保管
、製備、使用、處置情況；每一種菌種一定要有檢測鑒定報告（具體的的鑒定方法見菌種質量報告鑒定證書上的方法）；

具體菌種保存方法一般為：

將複蘇後肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例（肉湯8.5mL+甘油1.5mL）混合，-30℃凍存
，（可用2mL凍存管凍存多管）
，作為保藏儲備菌株F1代
，也可使用商品化的菌種保存管。

1.7菌種的傳代

1.7.1 標準菌株的複蘇：

① 菌種操作應在無菌條件下進行
，防止雜菌汙染。

② 每次使用和複蘇時隻需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養。 

1.7.2 標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。（確認方法一般為他們各自獨有的形態
，在鑒別培養基上的形態） 

1.7.3 工作菌株轉接的方法：

① 配製營養瓊脂培養基（溶血性弧菌加3%氯化鈉 ），121℃高壓滅菌15分鍾後分裝在試管內，冷卻後備用。

② 在無菌條件下，用接種環挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種
，放置在36℃的培養箱內培養24小時。 

1.7.4 工作菌株的使用

1.7.4.1 內部質量控製：一個月一次陽性對照、培養基每批驗收；

1.7.4.2 外部質量控製：能力驗證、實驗室比對； 

1.7.5 工作菌株的期間核查

1.7.5.1 期間核查的頻率：每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

1.7.5.2 工作菌株期間核查的方法及依據：同工作菌株的確認一樣。

1.7.5.3 建立標準菌株期間核查記錄。

1.8菌種的標識和使用期限

1.8.1 標識：菌種代數的計算為幹粉菌種為第0代，轉接一次加一代。具體標識為：例單增李斯特氏菌第0代，標識為DZ-0，第一代標識為DZ-01第一代有12支，則DZ-01-01、……
、DZ-01-12；並標明日期：如2016.02.13這樣填寫。

1.9 菌種的保藏

1.9.1 將試管內菌種放入冰箱中2～8℃冷藏保存。

1.9.2 將傳代並經過培養後的菌種放入冰箱中2～8℃保存。每支保存菌種需標明菌名、標準編號、傳次、傳代日期。

1.10 菌種的銷毀

1.10.1 菌種使用後或超過貯存期的應進行銷毀。

1.10.2 需銷毀的菌種
，應用高壓蒸汽（121℃）滅菌30分鍾。

1.10.3 滅菌後
，再進行清洗和處理。

1.10.4 銷毀的菌種應做好記錄。銷毀時由化驗負責人監督銷毀，保管人員負責銷毀。

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