動物的選擇。常見的可以用來製備抗體的動物有：小鼠(Mouse)、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea pig)
、倉鼠(Hamster)、兔(Rabbit)
、綿羊(Sheep)、山羊(Goat)
、馬(Horse)、驢(Donkey)、奶牛(Cow)，還(hai)有(you)的(de)還(hai)用(yong)雞(ji)或(huo)者(zhe)鴨(ya)的(de)。選(xuan)擇(ze)動(dong)物(wu)無(wu)非(fei)就(jiu)是(shi)考(kao)慮(lv)兩(liang)個(ge)問(wen)題(ti)
，第(di)一(yi)個(ge)問(wen)題(ti)是(shi)能(neng)否(fou)具(ju)有(you)較(jiao)好(hao)的(de)免(mian)疫(yi)效(xiao)果(guo)。特(te)別(bie)是(shi)對(dui)於(yu)抗(kang)原(yuan)是(shi)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)情(qing)況(kuang)
，為(wei)了(le)保(bao)證(zheng)免(mian)疫(yi)成(cheng)功(gong)，就(jiu)要(yao)求(qiu)宿(xiu)主(zhu)動(dong)物(wu)與(yu)抗(kang)原(yuan)來(lai)源(yuan)物(wu)種(zhong)之(zhi)間(jian)需(xu)要(yao)有(you)較(jiao)遠(yuan)的(de)親(qin)緣(yuan)關(guan)係(xi)，如(ru)果(guo)不(bu)太(tai)確(que)定(ding)親(qin)緣(yuan)關(guan)係(xi)的(de)遠(yuan)近(jin)
，可(ke)以(yi)把(ba)抗(kang)原(yuan)的(de)序(xu)列(lie)與(yu)被(bei)免(mian)疫(yi)的(de)動(dong)物(wu)相(xiang)應(ying)的(de)蛋(dan)白(bai)的(de)序(xu)列(lie)進(jin)行(xing)一(yi)個(ge)對(dui)比(bi)，優(you)先(xian)選(xuan)擇(ze)同(tong)源(yuan)性(xing)較(jiao)低(di)的(de)物(wu)種(zhong)進(jin)行(xing)免(mian)疫(yi)。選(xuan)擇(ze)動(dong)物(wu)的(de)第(di)二(er)個(ge)問(wen)題(ti)是(shi)抗(kang)血(xue)清(qing)產(chan)量(liang)的(de)問(wen)題(ti)

，其(qi)實(shi)很(hen)多(duo)情(qing)況(kuang)下(xia)需(xu)要(yao)的(de)血(xue)清(qing)量(liang)就(jiu)很(hen)大(da)程(cheng)度(du)上(shang)限(xian)製(zhi)了(le)選(xuan)擇(ze)餘(yu)地(di)。根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)目(mu)的(de)不(bu)同(tong)，抗(kang)血(xue)清(qing)的(de)用(yong)量(liang)也(ye)有(you)所(suo)不(bu)同(tong)。比(bi)如(ru)說(shuo)隻(zhi)想(xiang)做(zuo)幾(ji)次(ci)Western Blot隻需要一點點血清就夠了，此時就可以選用小鼠這樣的小動物，而如果想生產二抗作為商業使用，則可選用羊、驢、馬這樣的大型動物，大型動物還可以進行多次放血，以提高動物的利用率。這裏列幾種常見的物種以及它們的血清產量：

物種	抗血清產量(含血液中其它成份)
小鼠	每次可采0.1-0.2ml，每月可采兩次。也可以一次放血，產量約為1-1.5ml。
豚鼠	每次可采1-2ml，每月可采兩次。也可以一次放血，產量約為10-15ml。
兔	每次可采20ml，每月可采兩次。也可以一次放血，產量約為100ml。
山羊	每次可采血800ml ，每月可采兩至三次。
馬	每次可采血3L，每月可采兩次。一年可以采10L以上。

如果是製備單克隆抗體
，那選擇的餘地就更小了
，目前主流做單抗的動物主要有小鼠、兔
、大鼠。而且除了Epitomics公司外，其它單位是不可以製備兔單抗的(已申請專利)。另ling外wai需xu要yao指zhi出chu的de是shi
，實shi驗yan動dong物wu都dou有you相xiang應ying的de法fa律lv法fa規gui，在zai進jin行xing實shi驗yan之zhi前qian需xu要yao參can考kao相xiang應ying的de規gui定ding，隻zhi有you獲huo得de了le相xiang關guan的de資zi質zhi才cai可ke以yi進jin行xing實shi驗yan。實shi驗yan動dong物wu也ye由you相xiang應ying的de機ji構gou繁fan殖zhi和he保bao種zhong
，選xuan擇ze動dong物wu應ying該gai使shi用yong特te定ding的de動dong物wu品pin係xi，以yi保bao證zheng實shi驗yan的de穩wen定ding性xing。

免疫佐劑(Adjuvant)。免疫佐劑主要有兩個作用：一yi是shi刺ci激ji機ji體ti引yin起qi免mian疫yi反fan應ying，另ling一yi個ge作zuo用yong是shi將jiang抗kang原yuan包bao起qi來lai延yan緩huan釋shi放fang，起qi到dao相xiang當dang於yu多duo次ci刺ci激ji的de效xiao果guo。可ke以yi用yong來lai製zhi備bei抗kang體ti的de免mian疫yi佐zuo劑ji主zhu要yao有you這zhe麼me幾ji類lei：鋁鹽、油乳、脂質體、CpG
、細胞因子、經過處理的微生物或其代謝物。關於它們各自的特性我這裏就不作詳細的介紹了
，有興趣的可以看看這篇文獻：《我國免疫佐劑的研究進展》(劉悅竹，2008)。目前應用得比較廣泛的商品化佐劑主要有三種：弗氏佐劑(Freund's Adjuvant)、Ribi Adjuvant、Titermax。弗氏佐劑是應用最多的佐劑，分為弗氏完全佐劑( Freund's Complet Adjuvant,FCA)和弗氏不完佐劑(Freund's Incomplete Adjuvant,FIA)
， 弗fu氏shi完wan全quan佐zuo劑ji由you石shi蠟la油you和he羊yang毛mao脂zhi以yi及ji結jie核he分fen枝zhi杆gan菌jun的de細xi胞bao壁bi成cheng分fen組zu成cheng，它ta是shi細xi胞bao免mian疫yi的de刺ci激ji劑ji。弗fu氏shi不bu完wan全quan佐zuo劑ji不bu含han分fen枝zhi杆gan菌jun
，其qi它ta同tong弗fu氏shi完wan全quan佐zuo劑ji。弗fu氏shi不bu完wan全quan佐zuo劑ji僅jin能neng刺ci激ji體ti液ye免mian疫yi。通tong常chang在zai免mian疫yi動dong物wu時shi

，先xian使shi用yong弗fu氏shi完wan全quan佐zuo劑ji進jin行xing首shou次ci免mian疫yi，後hou用yong弗fu氏shi不bu完wan全quan佐zuo劑ji作zuo為wei加jia強qiang免mian疫yi，二er者zhe使shi用yong前qian都dou需xu要yao與yu抗kang原yuan進jin行xing完wan全quan乳ru化hua。弗fu氏shi佐zuo劑ji會hui引yin起qi動dong物wu局ju部bu肉rou芽ya腫zhong或huo者zhe無wu菌jun性xing膿nong腫zhong
，人ren體ti接jie觸chu可ke能neng導dao致zhi風feng濕shi病bing，誤wu入ru眼yan睛jing可ke能neng造zao成cheng失shi明ming
，因yin此ci在zai操cao作zuo時shi需xu要yao注zhu意yi防fang護hu。

Ribi佐(zuo)劑(ji)則(ze)采(cai)用(yong)可(ke)被(bei)代(dai)謝(xie)的(de)角(jiao)鯊(sha)烯(xi)代(dai)替(ti)礦(kuang)物(wu)油(you)，同(tong)時(shi)它(ta)也(ye)含(han)有(you)分(fen)枝(zhi)杆(gan)菌(jun)的(de)成(cheng)份(fen)，與(yu)弗(fu)氏(shi)佐(zuo)劑(ji)相(xiang)比(bi)，它(ta)毒(du)性(xing)小(xiao)，可(ke)以(yi)減(jian)小(xiao)動(dong)物(wu)的(de)局(ju)部(bu)接(jie)種(zhong)反(fan)應(ying)
，但(dan)是(shi)同(tong)樣(yang)可(ke)以(yi)產(chan)生(sheng)高(gao)親(qin)和(he)力(li)的(de)抗(kang)體(ti)(抗原為蛋白質)。

Titermax不像弗氏佐劑和Ribinayangshiyoubaoshuidejiegou，ershiyoujiaoshaxihefeilizixingqianduanjuhewuzucheng，cijuhewushiyoushushuixingdejuyangbingxiheqinshuixingdejuyangyixixingchengdeyifenziduojutizuchengde。youyutongshicunzaiqinshuibufenheshushuibufen，gukeyihekangyuanxingchengwendingderuzhuoye。Titermax毒性低
，但是價格貴
，而且對於弱免疫原性的抗原能否引起機體的免疫反應尚存在爭議。

另外向大家推薦一款國產的佐劑，由北京康碧泉公司研製
，商品名叫Quickantibody
，此佐劑不含蛋白質成分，而且免疫方式簡單，無需乳化抗原(隻需要簡單混合即可免疫)，同時免疫周期短，抗原用量少
，推薦大家使用。

佐劑和抗原的乳化 大部分佐劑在使用前都需要乳化
，很多網友問起過乳化方法的問題，在這裏我簡單地向大家介紹幾種我個人覺得比較好的方法吧。 先(xian)來(lai)了(le)解(jie)一(yi)下(xia)怎(zen)麼(me)樣(yang)才(cai)算(suan)乳(ru)化(hua)好(hao)了(le)。對(dui)於(yu)弗(fu)氏(shi)佐(zuo)劑(ji)這(zhe)類(lei)油(you)包(bao)水(shui)結(jie)構(gou)的(de)佐(zuo)劑(ji)來(lai)說(shuo)
，乳(ru)化(hua)完(wan)成(cheng)後(hou)
，可(ke)以(yi)取(qu)一(yi)滴(di)乳(ru)化(hua)過(guo)的(de)液(ye)滴(di)滴(di)在(zai)一(yi)杯(bei)清(qing)水(shui)裏(li)，看(kan)看(kan)此(ci)液(ye)滴(di)是(shi)否(fou)分(fen)散(san)
，如(ru)果(guo)不(bu)分(fen)散(san)則(ze)表(biao)明(ming)乳(ru)化(hua)完(wan)全(quan)，否(fou)則(ze)還(hai)要(yao)接(jie)著(zhe)乳(ru)化(hua)。關(guan)於(yu)乳(ru)化(hua)的(de)方(fang)法(fa)，比(bi)較(jiao)好(hao)用(yong)的(de)有(you)三(san)種(zhong)：第一種比較費時間
，就是將抗原和佐劑放在EP管(guan)裏(li)，然(ran)後(hou)用(yong)槍(qiang)反(fan)複(fu)吹(chui)打(da)，然(ran)後(hou)放(fang)在(zai)渦(wo)旋(xuan)儀(yi)上(shang)反(fan)複(fu)渦(wo)旋(xuan)。第(di)二(er)種(zhong)方(fang)法(fa)就(jiu)是(shi)將(jiang)抗(kang)原(yuan)和(he)佐(zuo)劑(ji)用(yong)槍(qiang)混(hun)合(he)後(hou)放(fang)在(zai)超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)儀(yi)下(xia)超(chao)聲(sheng)，這(zhe)個(ge)方(fang)法(fa)比(bi)較(jiao)快(kuai)速(su)，但(dan)是(shi)需(xu)要(yao)一(yi)個(ge)配(pei)有(you)小(xiao)探(tan)頭(tou)的(de)超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)儀(yi)。第(di)三(san)種(zhong)方(fang)法(fa)也(ye)就(jiu)最(zui)簡(jian)單(dan)最(zui)常(chang)用(yong)的(de)方(fang)法(fa)了(le)：準備好兩個玻璃注射器和一個魯爾接頭，將抗原和佐劑用槍在EP管guan內nei混hun合he好hao，然ran後hou吸xi入ru一yi個ge注zhu射she器qi內nei
，再zai用yong魯lu爾er接jie頭tou將jiang另ling一yi個ge注zhu射she器qi與yu它ta接jie上shang
，把ba抗kang原yuan和he佐zuo劑ji來lai回hui在zai兩liang個ge注zhu射she器qi內nei推tui動dong，兩liang分fen鍾zhong左zuo右you就jiu可ke以yi完wan成cheng乳ru化hua工gong作zuo。如ru果guo沒mei有you魯lu爾er接jie頭tou，也ye可ke以yi用yong一yi小xiao截jie一yi次ci性xing輸shu液ye管guan將jiang兩liang個ge注zhu射she器qi連lian接jie
，不bu過guo有you網wang友you反fan映ying這zhe個ge不bu是shi很hen好hao用yong。

免疫方案(1)免疫部位：常見的免疫部位有皮下、肌肉

、腹腔、腳墊
、靜脈

、pizang。daxingdongwuduoweipixiahuojiroumianyi
，xiaoxingdongwukecaiyonghoumiandemianyibuwei。zhibeiduokangshi，zhenggeliuchengkecaiyongtongyizhongmianyibuwei，yekeyiduozhongbuweilianheshiyong

，danshichucimianyidoujianyizaipixiajinxing。zaizhibeidankangshi
，shenzhihaikeyijiangpizangquchujinxingtiwaimianyi，pizangmianyizuidadeyoushijiushikeyidadajianxiaomianyijiliangbingsuoduanzhouqi
，erqiehaikeyijiejuegaotongyuanxingdanbaiwufamianyichenggongdewenti。dantiwaimianyibunengxingchengwanzhengdemianyiyingdafanying，kangtiwufachengshu
，suochanshengdekangtiquanbuweiIgM
，不能產生其它類型的抗體。對體外免疫感興趣的朋友可以看看這篇文獻：《體外免疫法製備單克隆抗體的研究》(陸芹章，1994)。(2)免疫形式。抗原通常需要與佐劑混合充分後才進行免疫，也有改進不用佐劑的方法，比如可以將抗原跑SDS-PAGE膠，然後將膠進行磨碎充分即可進行免疫，這樣可以將抗原(蛋白質類抗原)純化
，而且還可以延緩抗原的釋放。也有人將抗原從SDS-PAGE膠上轉移到NC膜上或者PVDFmoshangranhoujiangqimosuijinxingmianyi，haiyourenjiangkangyuanlianjiedaoqiongzhikelidengguxiangzaitishang，zheyangkeyizengjiakangyuandekelihuachengdu，yekeyizengdakangyuanyujitimianyiyingdaxitongdejiechu。(3)免疫劑量。免疫劑量根據被免疫的動物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很遠。如果用兔製備多抗，首次免疫(皮下)一般在200-1000ug之間，對於大鼠，首次免疫(皮下)為100-500ug

，對於小鼠
， 首次免疫(皮下)一般在10-100ug之間
，加強免疫一般為首次免疫劑量的20%-50%。尾靜脈或脾內方式加強則可減至幾微克至十微克。對於體型比較大的動物可酌量增加(不能按照體重比增加)
，具體的用量請大家參考文獻。 (4)免疫周期。首次免疫後，一般在10-15d左右抗體的產量會達到一個峰值
，但是此時抗體親和力不夠，大部分都是IGM，因此需要進行加強免疫，加強免疫一般在首次免疫後三至四周進行。第二次、第三次加強免疫間隔可以縮短至2-3周(zhou)。這(zhe)個(ge)時(shi)間(jian)不(bu)太(tai)能(neng)長(chang)也(ye)不(bu)能(neng)太(tai)短(duan)，太(tai)短(duan)起(qi)不(bu)到(dao)加(jia)強(qiang)的(de)效(xiao)果(guo)，而(er)且(qie)還(hai)容(rong)易(yi)引(yin)起(qi)免(mian)疫(yi)耐(nai)受(shou)，如(ru)果(guo)相(xiang)隔(ge)太(tai)久(jiu)，則(ze)前(qian)麵(mian)的(de)免(mian)疫(yi)將(jiang)失(shi)去(qu)初(chu)步(bu)刺(ci)激(ji)的(de)效(xiao)果(guo)。如(ru)果(guo)是(shi)采(cai)用(yong)脾(pi)內(nei)免(mian)疫(yi)，則(ze)可(ke)以(yi)在(zai)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)上(shang)縮(suo)短(duan)免(mian)疫(yi)周(zhou)期(qi)。